| Project/Area Number |
20K16927
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Review Section |
Basic Section 52050:Embryonic medicine and pediatrics-related
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| Research Institution | Kobe University |
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Principal Investigator |
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2022-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2021)
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| Budget Amount *help |
¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000)
Fiscal Year 2021: ¥2,080,000 (Direct Cost: ¥1,600,000、Indirect Cost: ¥480,000)
Fiscal Year 2020: ¥2,210,000 (Direct Cost: ¥1,700,000、Indirect Cost: ¥510,000)
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| Keywords | PHOX2B / CCHS / iPS細胞 / ASO / アンチセンス核酸 / 先天性中枢性低換気症候群 |
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| Outline of Research at the Start |
本研究の目的は、CCHSの治療法開発の第一歩として、「CCHSの原因遺伝子であるPHOX2B遺伝子の20アラニン鎖における7アラニン伸長変異 (+7Alamutant)の発現を特異的に抑制するアンチセンス核酸(AO)医薬の取得」である。具体的には、①PHOX2B (+7Ala mutant)を有するCCHS患児より血液サンプルを収集、DNA抽出を行い、ハプロタイプを同定、②患者検体由来gDNAよりミニ遺伝子を作製、③①で同定したPHOX2B (+7Ala mutant)に対するAOの設計・スクリーニング、④患者由来の血液サンプルよりiPS細胞を樹立し、神経細胞へ分化誘導、AO効果の検証を行う。
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| Outline of Final Research Achievements |
(1) ASO screening was performed using mini-genes containing Ex1-Ex3 of PHOX2B from genomic DNA derived from patient samples. Four ASOs that specifically suppress the expression of PHOX2B(+7Ala mutant) mRNA were obtained. (2) Four iPS cell lines were established from patient-derived blood samples and induced to differentiate into PHOX2B-expressing neurons. In the future, the effect of ASO on PHOX2B (+7Ala mutant) mRNA suppression will be evaluated in the differentiated neurons.
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| Academic Significance and Societal Importance of the Research Achievements |
本研究では、PHOX2B遺伝子の7アラニン伸長変異mRNAの発現をASOで抑制することでCCHSに対する治療法開発を試みた。ミニ遺伝子を利用して得られたASOはPHOX2B (+7Ala mutant) pre-mRNAに特異的に作用し、スプライシングを抑制することで変異mRNAの産生を抑制することが示唆された。さらに、本研究で樹立したCCHS患者由来iPS細胞は、PHOX2B遺伝子の7アラニン伸長変異を標的とするASOや低分子化合物などのスクリーニングに利用できることからCCHSの新規治療法の開発に役立つ。
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