Elucidation of pathophysiology of idiopathic nephrotic syndrome by microRNA analysis and development of novel therapeutic agents
| Project/Area Number |
20K17283
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Review Section |
Basic Section 53040:Nephrology-related
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
辻 憲二 岡山大学, 医歯薬学域, 助教 (10816995)
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| Project Period (FY) |
2020-04-01 – 2024-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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| Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2023: ¥910,000 (Direct Cost: ¥700,000、Indirect Cost: ¥210,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2020: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
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| Keywords | ネフローゼ症候群 / マイクロRNA / 巣状分節性糸球体硬化症 |
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| Outline of Research at the Start |
本研究は、特発性ネフローゼ（NS）症候群についてエクソソーム内のマイクロ (micro)RNAの解析により新たな病態機序解明を行うものである。特発性NSを呈する巣状分節性糸球体硬化症及び微小変化型NSは、これまでの知見より患者血清中の液性因子が病因であることが示唆される一方で、明らかな因子の特定にはいたっていない。本研究では特発性NSの血清中のエキソソーム内のmicroRNAを解析し、得られた疾患特異的microRNA候補に対するmicroRNA-mimic及び抗体を用いて糸球体上皮細胞障害への影響を解析することにより特発性NS発症の病態機序解明を行うとともに新規治療法を探求するものである。
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は、特発性ネフローゼ症候群について、エクソソーム内のマイクロ(micro)RNAの観点から新たな病態機序解明を行うものである。特発性ネフローゼ症候群（巣状分節性糸球体硬化症/微小変化型ネフローゼ症候群）患者血清よりエクソソームを抽出しエクソソーム内の因子が病態に関与することをin vivo及びin vitroにおいて評価し、さらに患者血清エクソソームより抽出したmicroRNAの解析により疾患特異的に変化するmicroRNAをリストアップし、それらのmicroRNAmimicを作成してin vivoおよびin vitroの系を用いて糸球体上皮細胞障害を呈する疾患特異的なmicroRNAの特定を目指している。
特発性ネフローゼ症候群患者及び対照群より採取した血清よりTIM4法を用いたエクソソーム抽出キットを用いてエクソソームを抽出した。抽出エクソソームを透過型電子顕微鏡を用いて評価し、純度の高いエクソソーム抽出を確認した。また、エクソソーム特異的抗体を用いたイムノブロット法により抽出エクソソーム分画におけるCD63及びCD9の陽性及びグリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ(GAPDH)の陰性を確認した。以上より純度の高いエクソソーム抽出に成功したと考えられた。現在ネフローゼ症候群症例の検体を収集しつつ、抽出したエクソソームを用いたmicroRNAの解析及びin vivo及びin vitroの系における病態への関連についての検討を進めている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
新型コロナ感染蔓延に伴う影響のため、ネフローゼ症候群患者の入院が例年より少ないため症例の蓄積の面において予定より遅れが認められている。
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| Strategy for Future Research Activity |
ネフローゼ症候群患者及び対照群より抽出したエクソソームを用いたmicroRNAの解析及びin vivo及びin vitroの系における病態への関連についての検討を進めていく。具体的には抽出エクソソームの野生型ラットへの投与及びその後の蛋白尿及び糸球体上皮細胞障害の解析を行う。また培養糸球体上皮細胞に抽出エクソソームを添付し培養後の細胞から蛋白質及びRNAを抽出してウェスタンブロット法、定量PCR等により上皮細胞の形態的及び形質的変化を解析する。また免疫蛍光抗体法による蛋白発現の強弱及び発現部位の評価を行いNephrin, CD2AP, Podocin等の上皮細胞特異的蛋白の発現の評価及び局在及びアポトーシス、ネクロプトーシスを含めた糸球体上皮細胞障害の機序の解明も目指す。
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Report
(3 results)
Research Products
(13 results)
