Evaluation of cDNA synthesis and RNA amplification with highly efficient reverse transcriptases and expansion of their use

• Project/Area Number: 21580110
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Section: 一般
• Research Field: Applied biochemistry
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: YASUKAWA Kiyoshi 京都大学, 大学院・農学研究科, 准教授 (30397559)
• Project Period (FY): 2009 – 2011
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2011)
• Budget Amount: ¥4,940,000 (Direct Cost: ¥3,800,000、Indirect Cost: ¥1,140,000); Fiscal Year 2011: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000); Fiscal Year 2010: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000); Fiscal Year 2009: ¥2,080,000 (Direct Cost: ¥1,600,000、Indirect Cost: ¥480,000)
• Keywords: 酵素利用学 / ウイルス / 核酸 / 酵素 / 酵素反応 / バイオテクノロジー

Research Abstract

We generated highly thermostable reverse transcriptases from Moloney murine leukemia virus and avian myeloblastosis virus(E286R/E302K/L435R/D524A and V238R/L388R/D450A, respectively) by site-directed mutagenesis. It is suggested that introduction of positive charges into reverse transcriptases at positions that have been implicated in the interaction with T/P is effective to stabilize reverse transcriptases.

Research Products

• [Journal Article] Improving the thermal stability of avian myeloblastosis virus reverse transcriptaseαsubunit by site-directed mutagenesis (2012)
  • Author(s): Konishi, A., Yasukawa, K., and Inouye, K.
  • Journal Title: Biotechnol. Lett Volume: (in press) Issue: 7 Pages: 1209-1215
  • DOI: 10.1007/s10529-012-0904-9
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Comparison of the Thermal Stabilities of the .ALPHA..BETA. Heterodimer and the .ALPHA. Subunit of Avian Myeloblastosis Virus Reverse Transcriptase (2011)
  • Author(s): Konishi, A., Nemoto, D., Yasukawa, K., and Inouye, K.
  • Journal Title: Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry Volume: 75 Issue: 8 Pages: 1618-1620
  • DOI: 10.1271/bbb.110238
  • NAID: 10029591991
  • ISSN: 0916-8451, 1347-6947
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Increase in thermal stability of Moloney murine leukaemia virus reverse transcriptase by site-directed mutagenesis (2010)
  • Author(s): Yasukawa, K., Mizuno, M., Konishi, A., and Inouye, K.
  • Journal Title: J. Biotechnol Volume: Vol 150 Issue: 3 Pages: 299-306
  • DOI: 10.1016/j.jbiotec.2010.09.961
  • NAID: 120002661511
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Effects of Organic Solvents on the Reverse Transcription Reaction Catalyzed by Reverse Transcriptases from Avian Myeloblastosis Virus and Moloney Murine Leukemia Virus (2010)
  • Author(s): Yasukawa K., Konishi, A., and Inouye, K.
  • Journal Title: Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry Volume: 74 Issue: 9 Pages: 1925-1930
  • DOI: 10.1271/bbb.100337
  • NAID: 10027559845
  • ISSN: 0916-8451, 1347-6947
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Detection of cesA mRNA from Bacillus cereus by RNA-specific amplification (2010)
  • Author(s): Yasukawa, K., Agata, N., and Inouye, K.
  • Journal Title: Enzyme Microb. Technol Volume: Vol 46 Issue: 5 Pages: 391-396
  • DOI: 10.1016/j.enzmictec.2009.12.009
  • NAID: 120002191870
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Insight into the Mechanism of the Stabilization of Moloney Murine Leukaemia Virus Reverse Transcriptase by Eliminating RNase H Activity (2010)
  • Author(s): Mizuno, M., Yasukawa, K., and Inouye, K.
  • Journal Title: Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry Volume: 74 Issue: 2 Pages: 440-442
  • DOI: 10.1271/bbb.90777
  • NAID: 10027551993
  • ISSN: 0916-8451, 1347-6947
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Effects of organic solvents on the reverse transcription reaction catalyzed by reverse transcriptases from avian myeloblastosis virus and Moloney murine leukaemia virus (2010)
  • Author(s): Yasukawa K., Konishi, A., Inouye, K.
  • Journal Title: Biosci.Biotechnol.Biochem. Volume: 74 Pages: 1925-1930
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Increase in thermal stability of Moloney murine leukaemia virus reverse transcriptase by site-directed mutagenesis (2010)
  • Author(s): Yasukawa, K., Mizuno, M., Konishi, A., Inouye, K.
  • Journal Title: J.Biotechnol. Volume: 150 Pages: 299-306
  • NAID: 120002661511
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Detection of cesA mRNA from Bacillus cereus by RNA-specific amplification (2010)
  • Author(s): Yasukawa, K., Agata, N., Inouye, K.
  • Journal Title: Enz. Microb. Technol. 46 Pages: 391-396
  • NAID: 120002191870
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Insight into the mechanism of the stabilization of Moloney murine leukaemia virus reverse transcriptase by eliminating RNase H activity (2010)
  • Author(s): Mizuno, M., Yasukawa, K., Inouye, K.
  • Journal Title: Biosci. Biotechnol. Biochem. 74 Pages: 440-442
  • NAID: 10027551993
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] (2009)
  • Author(s): 保川清
  • Journal Title: 産業酵素の応用技術と最新動向(井上國世、監修)(シーエムシー出版)
• [Presentation] 組換えHIV-1逆転写酵素の調製と性状解析 (2012)
  • Author(s): 保川清、篠村まゆ、井上國世
  • Organizer: 2012年度日本農芸化学会大会
  • Place of Presentation: 京都女子大学
  • Year and Date: 2012-03-23
• [Presentation] 部位特異的変異導入によるAMV逆転写酵素αサブユニットの熱安定性の向上 (2012)
  • Author(s): 小西篤、保川清、井上國世
  • Organizer: 2012年度日本農芸化学会大会
  • Place of Presentation: 京都女子大学
  • Year and Date: 2012-03-23
• [Presentation] 部位特異的変異導入によるAMV逆転写酵素・サブユニットの熱安定性の向上 (2012)
  • Author(s): 小西篤、保川清、井上國世
  • Organizer: 2012年度日本農芸化学会大会
  • Place of Presentation: 京都女子大学
  • Year and Date: 2012-03-23
• [Presentation] AMV逆転写酵素αβヘテロダイマーとαサブユニットの安定性の比較 (2011)
  • Author(s): 小西篤、根本大資、保川清、井上國世
  • Organizer: 2011年度日本農芸化学会近畿・中部合同支部大会
  • Place of Presentation: 京都大学本部地区北部キャンパス
  • Year and Date: 2011-10-02
• [Presentation] 部位特異的変異によるMMLV逆転写酵素の熱安定性の向上 (2011)
  • Author(s): 小西篤、根本大資、保川清、井上國世
  • Organizer: 2011年度日本生物工学会大会
  • Place of Presentation: 東京農工大学小金井キャンパス
  • Year and Date: 2011-09-27
• [Presentation] Comparison of the thermal stabilities of theαβheterodimer andαsubunit of avian myeloblastosis virus reverse transcriptase (2011)
  • Author(s): 小西篤、根本大資、保川清、井上國世
  • Organizer: 2011年度日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 国立京都国際会館
  • Year and Date: 2011-09-23
• [Presentation] Comparison of the thermal stabilities of the αβ heterodimer and α subunit of avian myeloblastosis virus reverse transcriptase (2011)
  • Author(s): 小西篤、根本大資、保川清、井上國世
  • Organizer: 2011年度日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 国立京都国際会館
  • Year and Date: 2011-09-23
• [Presentation] 部位特異的変異による耐熱性MMLV逆転写酵素の作製 (2011)
  • Author(s): 小西篤、水野匡貴、保川清、井上國世
  • Organizer: 2011年度日本生化学会近畿支部例会
  • Place of Presentation: 関西医科大学
  • Year and Date: 2011-05-21
• [Presentation] タンパク質工学による逆転写酵素の耐熱化(シンポジウム:タンパク質工学による耐熱化酵素創製の新しい戦略) (2011)
  • Author(s): 保川清
  • Organizer: 2011年度日本農芸化学会大会
  • Place of Presentation: 京都女子大学
  • Year and Date: 2011-03-28
• [Presentation] 昆虫細胞で発現させた組換えAMV逆転写酵素αサブユニットの精製と性状解析 (2011)
  • Author(s): 保川清、根本大資、井上國世
  • Organizer: 2011年度日本農芸化学会大会
  • Place of Presentation: 京都女子大学
  • Year and Date: 2011-03-26
• [Presentation] 部位特異的変異導入によるMMLV逆転写酵素の熱安定性の向上 (2011)
  • Author(s): 小西篤、水野匡貴、保川清、井上國世
  • Organizer: 2011年度日本農芸化学会大会
  • Place of Presentation: 京都女子大学
  • Year and Date: 2011-03-26
• [Presentation] Effects of organic solvents on the reverse transcription reaction catalyzed by reverse transcriptases from avian myeloblastosis virus and Moloney murine leukaemia virus (2010)
  • Author(s): 保川清、小西篤、井上國世
  • Organizer: BMB2010
  • Place of Presentation: 神戸ポートアイランド
  • Year and Date: 2010-12-07
• [Presentation] Effects of organic solvents on the reverse transcription reaction catalyzed by reverse transcriptases from avian myeloblastosis virus and Moloney marine leukaemia virus (2010)
  • Author(s): 保川清、小西篤、井上國世
  • Organizer: BMB2010
  • Place of Presentation: 神戸ポートアイランド
  • Year and Date: 2010-12-07
• [Presentation] AMV逆転写酵素とMMLV逆転写酵素による逆転写反応に対する有機溶媒の効果 (2010)
  • Author(s): 保川清、小西篤、井上國世
  • Organizer: 2010年度日本生物工学会大会
  • Place of Presentation: フェニックス・シーガイア・リゾート(宮崎市)
  • Year and Date: 2010-10-29
• [Presentation] AMVおよびMMLV逆転写酵素による逆転写反応に対する有機溶媒の効果 (2010)
  • Author(s): 保川清、小西篤、井上國世
  • Organizer: 2010年度日本農芸化学会関西支部大会
  • Place of Presentation: 近畿大学農学部
  • Year and Date: 2010-10-03
• [Presentation] 逆転写反応に対する溶媒の効果 (2010)
  • Author(s): 保川清、小西篤、井上國世
  • Organizer: 2010年度日本農芸化学会大会
  • Place of Presentation: 東京大学駒場キャンパス
  • Year and Date: 2010-03-29
• [Presentation] RNase H活性を消失させることによるモロニーマウス白血病ウイルス逆転写酵素(MMLV RT)の安定化の解析 (2010)
  • Author(s): 水野匡貴、保川清、井上國世
  • Organizer: 2010年度日本農芸化学会大会
  • Place of Presentation: 東京大学駒場キャンパス
  • Year and Date: 2010-03-29
• [Presentation] RNase H活性を消失させることによるモロニーマウス白血病ウイルス逆転写酵素(MMLV RT)の安定化の解析 (2010)
  • Author(s): 水野匡貴、保川清、井上國世
  • Organizer: 2010年度日本農芸化学会大会
  • Place of Presentation: 東京大学 駒場キャンパス
  • Year and Date: 2010-03-29
• [Presentation] 逆転写反応に対する溶媒の効果 (2010)
  • Author(s): 保川清、小西篤、井上國世
  • Organizer: 2010年度日本農芸化学会大会
  • Place of Presentation: 東京大学 駒場キャンパス
  • Year and Date: 2010-03-29
• [Presentation] 部位特異的変異によるMMLV逆転写酵素の活性と熱安定性の向上 (2009)
  • Author(s): 水野匡貴、保川清、井上國世
  • Organizer: 2009年度日本農芸化学会関西・中四国・西日本支部日本栄養・食糧学会九州・沖縄支部日本食品科学工学会西日本支部合同沖縄大会
  • Place of Presentation: 琉球大学千原キャンパス
  • Year and Date: 2009-10-31
• [Presentation] 部位特異的変異によるMMLV逆転写酵素の活性と熱安定性の向上 (2009)
  • Author(s): 水野匡貴、保川清、井上國世
  • Organizer: 2009年度日本農芸化学会関西・中四国・西日本支部日本栄養・食糧学会九州・沖縄支部日本食品科学工学会
  • Place of Presentation: 琉球大学 千原キャンパス
  • Year and Date: 2009-10-31
• [Presentation] A MMLV/AMVキメラ逆転写酵素の性質決定 (2009)
  • Author(s): 水野匡貴、保川清、井上國世
  • Organizer: 2009年度日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 神戸国際会議場
  • Year and Date: 2009-10-23
• [Presentation] MMLV/AMVキメラ逆転写酵素の性質の決定 (2009)
  • Author(s): 水野匡貴、保川清、井上國世
  • Organizer: 2009年度日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 神戸国際会議場
  • Year and Date: 2009-10-23
• [Presentation] AMV逆転写酵素とMMLV逆転写酵素の熱安定性に対する鋳型プライマーの効果 (2009)
  • Author(s): 保川清、根本大資、井上國世
  • Organizer: 2009年度日本生物工学会大会
  • Place of Presentation: 名古屋大学東山キャンパス
  • Year and Date: 2009-09-24
• [Presentation] AMV逆転写酵素とMMLV逆転写酵素の熱安定性に対する鋳型プライマーの効果 (2009)
  • Author(s): 保川清、根本大資、井上國世
  • Organizer: 2009年度日本生物工学会大会
  • Place of Presentation: 名古屋大学 東山キャンパス
  • Year and Date: 2009-09-24
• [Presentation] MMLV/AMVキメラ逆転写酵素の酵素化学的性質の決定 (2009)
  • Author(s): 水野匡貴、保川清、井上國世
  • Organizer: 2009年度日本生化学会近畿支部例会
  • Place of Presentation: 大阪医科大学本部キャンパス
  • Year and Date: 2009-07-18
• [Presentation] MMLV/AMVキメラ逆転写酵素の酵素化学的性質の決定 (2009)
  • Author(s): 水野匡貴、保川清、井上國世
  • Organizer: 2009年度日本生化学会近畿支部例会
  • Place of Presentation: 大阪医科大学 本部キャンパス
  • Year and Date: 2009-07-18
• [Book] 核酸増幅法.産業酵素の応用技術と最新動向 (2009)
  • Author(s): 保川清
  • Publisher: シーエムシー出版、東京
• [Remarks]
  • URL: http://www.enzchem.kais.kyoto-u.ac.jp/
• [Remarks]
  • URL: http://www.enzchem.kais.kyoto-u.ac.jp/
• [Remarks]
  • URL: http://www.enzchem.kais.kyoto-u.ac.jp/
• [Patent(Industrial Property Rights)] 変異型逆転写酵素 (2012)
  • Inventor(s): 保川清、小西篤、井上國世
  • Industrial Property Rights Holder: 京都大学
  • Industrial Property Number: 2012-030848
  • Filing Date: 2012-02-15
• [Patent(Industrial Property Rights)] 変異型逆転写酵素 (2012)
  • Inventor(s): 保川清, 小西篤, 井上國世
  • Industrial Property Rights Holder: 京都大学
  • Industrial Property Number: 2012-030848
  • Filing Date: 2012-02-15
• [Patent(Industrial Property Rights)] 変異型逆転写酵素 (2011)
  • Inventor(s): 保川清、井上國世
  • Industrial Property Rights Holder: 京都大学
  • Filing Date: 2011-08-09
  • Overseas
• [Patent(Industrial Property Rights)] 変異型逆転写酵素 (2011)
  • Inventor(s): 保川清, 井上國世
  • Industrial Property Rights Holder: 京都大学
  • Filing Date: 2011-08-09
  • Overseas
• [Patent(Industrial Property Rights)] 変異型逆転写酵素、それをコードする核酸、変異型逆転写酵素の製造方法、核酸関連酵素の熱安定性の向上方法、逆転写方法、逆転写反応キットおよび検査キット (2010)
  • Inventor(s): 保川清、井上國世
  • Industrial Property Rights Holder: 京都大学
  • Industrial Property Number: 2010-181471
  • Filing Date: 2010-08-13