| Project/Area Number |
21650086
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Nerve anatomy/Neuropathology
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| Research Institution | University of Tsukuba |
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Principal Investigator |
杉山 文博 筑波大学, 大学院・人間総合科学研究科, 准教授 (90226481)
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| Project Period (FY) |
2009 – 2010
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2010)
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| Budget Amount *help |
¥3,100,000 (Direct Cost: ¥3,100,000)
Fiscal Year 2010: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
Fiscal Year 2009: ¥1,600,000 (Direct Cost: ¥1,600,000)
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| Keywords | 脳梁欠損 / 突然変異 / 遺伝子改変マウス / FISH / 第18番染色体 / TASマウス / 責任遺伝子 |
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| Research Abstract |
1.FISHによる外来遺伝子染色体挿入領域の決定と候補遺伝子同定
現在までの研究において脳梁欠損遺伝子導入マウス(TASマウス)における外来遺伝子は第18染色体9.6～16.9Mbの間に挿入されていることが示された。
a)内在ゲノム配列と外来遺伝子との相対な位置関係のInterphase染色体FISH解析
Metaphase染色体ではさらなる絞り込みは困難なため、Interphase染色体を用い、外来遺伝子と内在性ゲノム配列をプローブとしたマルチカラーFISHにより挿入部位の絞り込みを実施した。結果、外来遺伝子は第18染色体11.1～12.9Mbの間に挿入されている可能性が示され、この領域にはCables1遺伝子のみが存在することが明らかとなった。
b)TASマウスの脳における候補遺伝子の発現解析
RT-PCR解析にてTASマウスの脳におけるCables1全長の遺伝子発現は観察されなかったが、市販されているCables1抗体を用いたウエスターン解析では発現が確認され、遺伝子発現と蛋白発現に矛盾が生じた。
2.脳梁欠損候補遺伝子KOマウスの作製
Cables1を欠損するES細胞をTbxas A&M Institute for Genomic Medicineより入手し、KOマウス作製を行ったが、Cables1 KOマウスは得られなかった。
本研究において、脳梁欠損機構にCables1が関わる可能性がゲノムレベルで示唆されたが、今後Cables1 KOマウスを作製し、脳梁欠損機構について詳細に解析を進めることが必要があることが明らかとなった。
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