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iPS細胞技術を用いたノックアウトラット作製法の確立

Research Project

Project/Area Number 21659070
Research Category

Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field General medical chemistry
Research InstitutionNiigata University

Principal Investigator

崎村 建司  新潟大学, 脳研究所, 教授 (40162325)

Project Period (FY) 2009 – 2010
Project Status Completed (Fiscal Year 2010)
Budget Amount *help
¥3,000,000 (Direct Cost: ¥3,000,000)
Fiscal Year 2010: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
Fiscal Year 2009: ¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
KeywordsES細胞 / ラット / ノックアウト / 発生工学 / 再生医学
Research Abstract

本研究の目的は、世界中の研究者から希求されているラットES細胞を樹立し、遺伝子改変ラットの実用化を図ることである。そのために、ips細胞の樹立の際に開発された各種の手法を用いてES細胞株を樹立するとともに未分化状態でES細胞を培養できる条件を確立し、キメラ動物作製に挑戦することである。この目的のために、N2B27培地とGSK-3阻害剤であるCHIR99021、MAPK阻害剤であるPD0325901とを用いて、BNラット及びSDラット胚からES様細胞株を樹立することに成功した。これらの細胞株は、30代以上継代してもES細胞の未分化マーカーであるOct3/4、SOX2、Lin28、Nanogに対する抗体でいずれも染色されることから、ES細胞としての必要条件を満たしていると考えている。また、この培養条件が未分化を維持するのに十分なものと判断できる。さらにラットES細胞での相同組換えをおこなうために、ラットNSE遺伝子にVenus遺伝子を挿入したノックインベクターを構築し、薬剤による陽性クローンの選別条件を検討した。その結果、ラットのES細胞株ではマウスと異なりpgkプロモーターの発現は十分でなく、CAGプロモーターなどより強力なもので薬剤耐性遺伝子を駆動する必要があることが明らかになった。さらにラットES細胞からキメラ胚を作るためのマーカーとして、Venus遺伝子を組み込んだトランスジェニックESクローンの樹立に成功した。これらの成果は、ラットES細胞を用いた遺伝子改変ラット作出の実用化へ確実な寄与をするものである。

Report

(2 results)
  • 2010 Annual Research Report
  • 2009 Annual Research Report
  • Research Products

    (28 results)

All 2011 2010 2009 Other

All Journal Article (12 results) (of which Peer Reviewed: 12 results) Presentation (13 results) Remarks (2 results) Patent(Industrial Property Rights) (1 results)

  • [Journal Article] Glutamate receptor δ2 is essential for input pathway-dependent regulation of synaptic AMPAR contents in cerebellar purkinje cells.2011

    • Author(s)
      Yamasaki, M., et al.
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      Volume: 116(23) Pages: 5060-5070

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      PLoS One.

      Volume: 5(11) Pages: 13817-13817

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      Anesth Analg. 110

      Pages: 461-465

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      群馬県渋川市伊香保
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  • [Remarks]

    • URL

      http://www.bri.niigata-u.ac.jp/~cellular/

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  • [Remarks]

    • URL

      http://www.bri.niigata-u.ac.jp/~cellular/

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  • [Patent(Industrial Property Rights)] ES細胞における相同組換え効率を改善する方法2010

    • Inventor(s)
      暗村建司・阿部学・八矢幸大
    • Industrial Property Rights Holder
      国立大学法人 新潟大学
    • Industrial Property Number
      2010-228524
    • Filing Date
      2010-10-08
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URL: 

Published: 2009-04-01   Modified: 2016-04-21  

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