| Project/Area Number |
21659076
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Pathological medical chemistry
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
清水 重臣 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教授 (70271020)
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| Project Period (FY) |
2009 – 2010
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2010)
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| Budget Amount *help |
¥3,100,000 (Direct Cost: ¥3,100,000)
Fiscal Year 2010: ¥1,200,000 (Direct Cost: ¥1,200,000)
Fiscal Year 2009: ¥1,900,000 (Direct Cost: ¥1,900,000)
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| Keywords | アポトーシス / ミトコンドリア / カスペース / Smac / Bc1-2 / 蛋白質スプライシング |
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| Research Abstract |
生体において、アポトーシスは生理学的,病理学的に極めて重要な役割を担っていると考えられている。しかしながら、生体内において、アポトーシスがいつ、どのような臓器で、どのような生理機能に関わっているか,疾患のどの場面で細胞死が関与しているかは、充分には解明されていない。我々は、このような課題を克服し、生体におけるアポトーシスの意義をより明確にする為に、アポトーシスをモニターできるマウスを作製し、種々の遺伝子改変マウスとの交配を行った。
具体的には、まず、(1)アポトーシス実行に不可欠の現象である「ミトコンドリアの膜透過性亢進」を時空間的に定量評価できるマウス、(2)アポトーシス実行に直接関わる蛋白質分解酵素カスペースの活性化をモニターできるマウス、の2種類を作成した。前者は、ミトコンドリア膜を赤色蛍光でラベルし、膜間腔に存在するSmac蛋白質に緑色蛍光を付加したマウスで、赤色と緑色の解離によって膜透過性変化がモニターできる。後者は、split GFPを用いてカスペース活性を定量評価できるマウスである。後者に関しては,蛍光蛋白質が充分には発現せず、モニターマウスとしては充分ではなかった。
一方、ミトコンドリア膜透過性をモニターするマウスに関しては、(1)マウス由来の線維芽細胞にアポトーシス刺激を加えると、刺激の多寡に応じて蛍光活性が認められる事、(2)アポトーシス抑制分子であるBc1-2を過剰発現したマウスと交配すると、蛍光活性が認められなくなる事、の2点より、アポトーシスモニターマウスとして有用である事が示された。さらに、このマウスを用いて、発生期にアポトーシスが生じている部位を観察したところ、指間の細胞や胸腺細胞においてアポトーシスが生じている事が明らかとなった。
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