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質量分析による膵液中変異蛋白の網羅的解析と膵疾患早期診断法の確立

Research Project

Project/Area Number 21659185
Research Category

Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research

Allocation TypeSingle-year Grants
Research Field Gastroenterology
Research InstitutionTohoku University

Principal Investigator

下瀬川 徹  東北大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (90226275)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 正宗 淳  東北大学, 病院, 助教 (90312579)
粂 潔  東北大学, 大学院・医学系研究科, 非常勤講師 (30431563)
Project Period (FY) 2009 – 2010
Project Status Completed (Fiscal Year 2010)
Budget Amount *help
¥3,000,000 (Direct Cost: ¥3,000,000)
Fiscal Year 2010: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
Fiscal Year 2009: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
Keywords質量分析 / 膵炎 / 膵癌
Research Abstract

本研究はこれまでに蓄積された遺伝学的知見をもとに、質量分析装置を用いて膵消化酵素や酵素阻害蛋白の変異蛋白を検出しようとするものである。膵分泌性トリプシンインヒビターの遺伝子変異は日本人の特発性慢性膵炎患者の27%に認められ、主要な膵炎関連遺伝子である。またアニオニックトリプシノーゲン遺伝子のp.G191R多型は、慢性膵炎患者とアルコール性急性膵炎患者で健常者より低頻度であり、膵炎に対し保護的に作用している。膵疾患患者の膵液各8ulをSDS-PAGEで分離した。ゲル内消化後、MALDI-TOF-MS(マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間質量分析)により解析した。その結果エラスターゼ、カルボキシペプチダーゼA1、カルボキシペプチダーゼB、アニオニックトリプシノーゲンなどの膵消化酵素を同定した。アニオニックトリプシノーゲンでは191番目のアミノ酸であるグリシンを含むペプチド断片を同定し、p.G191R多型を検出できる可能性が示された。しかし採集した膵液60検体中にG191R多型保有者は含まれていなかった。またnanoLC/esi-MS/MS(ナノスケール液体クロマトグラフィー/エレクトロスプレーイオン化タンデム質量分析計)で膵液を分析した。その結果、膵分泌性トリプシンインヒビターを含む酵素阻害蛋白や12種類の膵消化酵素など計90種類の蛋白を同定したが、変異蛋白を検出することはできなかった。一方、ダイレクトシークエンスによる遺伝子解析により膵分泌性トリプシンインヒビター(PSTI)の新規の遺伝子異常p.P45Sをはじめて同定した。p.P45Sを保有する患者の血清中PSTI値は低く、血清PSTI濃度のcut-off値を6.Ong/mlとするとP45Sや本邦の主要な異常であるIVS3+2T>Cの検出が感度78%、特異度96%で可能であり、遺伝子異常の拾い上げに有用と考えられた。

Report

(2 results)
  • 2010 Annual Research Report
  • 2009 Annual Research Report
  • Research Products

    (7 results)

All 2011 2010 2009

All Journal Article (5 results) (of which Peer Reviewed: 5 results) Presentation (2 results)

  • [Journal Article] Genetic background is different between sentinel and recurrent acute pancreatitis.2011

    • Author(s)
      Masamune A, et al.
    • Journal Title

      J Gastroenterol Hepatol

      Volume: 印刷中

    • Related Report
      2010 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] -651C/T promoter polymorphism in the CD14 gene is associated with severity of acute pancreatitis in Japan.2010

    • Author(s)
      Masamune A, et al.
    • Journal Title

      J Gastroenterol

      Volume: 45 Pages: 225-233

    • NAID

      10027214689

    • Related Report
      2010 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] -651C/T promoter polymorphism in the CD14 gene is associated with severity of acute pancreatitis in Japan2010

    • Author(s)
      Masamune A, et al.
    • Journal Title

      J Gastroenterol 45

      Pages: 225-233

    • NAID

      10027214689

    • Related Report
      2009 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Chronic pancreatitis and pancreatic cancer : prediction and mechanism2009

    • Author(s)
      Shimosegawa T, et al
    • Journal Title

      Clin Gastroenterol Hepatol 7

    • Related Report
      2009 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] A loss-of-function p.G191R variant in the anionic trypsinogen (PRSS2) gene in Japanese patients with pancreatic disorders2009

    • Author(s)
      Kume K, et al
    • Journal Title

      Gut 58

      Pages: 820-824

    • Related Report
      2009 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Measurement of serum PSTI level might be useful to detect IVS3+2T>C (c.194+2T>C) mutation in the SPINKI gene2010

    • Author(s)
      Kume K, et al.
    • Organizer
      18th UEGW 2010
    • Place of Presentation
      Spain Barcelona
    • Year and Date
      2010-10-26
    • Related Report
      2010 Annual Research Report
  • [Presentation] Toll-like receptor/CD14遺伝子多型は急性膵炎の重症化に関連する2009

    • Author(s)
      正宗淳、下瀬川徹
    • Organizer
      DDW-Japan 2009
    • Place of Presentation
      京都
    • Year and Date
      2009-10-15
    • Related Report
      2009 Annual Research Report

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Published: 2009-04-01   Modified: 2016-04-21  

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