Combined analysis of tertiary structure and function(s) of Clostridium botulinum type C and D phospholipase C

• Project/Area Number: 21790421
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Bacteriology (including Mycology)
• Research Institution: University of Miyazaki (2010); Okayama University (2009)
• Principal Investigator: SAKAGUCHI Yoshihiko University of Miyazaki, IR推進機構, 助教 (70403491)
• Project Period (FY): 2009 – 2010
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2010)
• Budget Amount: ¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000); Fiscal Year 2010: ¥2,080,000 (Direct Cost: ¥1,600,000、Indirect Cost: ¥480,000); Fiscal Year 2009: ¥2,210,000 (Direct Cost: ¥1,700,000、Indirect Cost: ¥510,000)
• Keywords: ボツリヌス菌 / ホスホリパーゼC / ウエルシュ菌α毒素 / 卵黄活性 / 溶血活性 / ホスファチジルコリン / スフィンゴミエリン / リポソーム

Research Abstract

Clostridium botulinum cultures are classified into seven types, types A to G, based on the antigenicity of the neurotoxins produced. Of these seven types, only types C and D produce phospholipase C (lecithinase, PLC) in addition to the neurotoxin. Phospholipase of C. perfringens is known as α-toxin, which is the best characterized of all clostridial phospholipases and is an important agent of gas gangrene. The toxin, which exhibits phospholipase C and sphingomyelinase (SMase) activities, causes hemolysis, necrosis, and death. Here we determined the PLC genes of C. botulinum type C and D (Cbotα and Dbotα) by using inverse PCR and primer walking, and expressed as a GST-fusion protein. We compare the enzymatic and biological activities (egg-yolk activity, hemolysis, and mouse lethality) of the purified protein of C. perfringens α-toxin, Cbotα, and Dbotα.

Research Products

• [Journal Article] A new cytosolicpathway from a Parkinsondisease-associated kinase, BRPK/PINK1:activation of AKT via MTORC2. (2011)
  • Author(s): Murata, H., Sakaguchi, M., Jin, Y., Sakaguchi, Y., Futami, J., Yamada, H., Kataoka, K., Huh, NH.
  • Journal Title: J.Biol.Chem. 286(9) Pages: 7182-7189
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A new cytosolic pathway from a Parkinson disease-associated kinase, BRPK/PINK1 : activation of AKT via mTORC2 (2011)
  • Author(s): Murata, H., Sakaguchi, M., Jin, Y., Sakaguchi, Y., Futami, J.I., Yamada, H., Kataoka, K., Huh, N.H.
  • Journal Title: J.Biol.Chem. Volume: 286 Pages: 7182-7189
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Transcriptionalregulation of a brown adipocyte-specificgene, UCP1, by KLF11 and KLF15. (2010)
  • Author(s): Yamamoto, K., Sakaguchi, M., Medina, RJ., Niida A., Sakaguchi, Y., Miyazaki, M., Kataoka, K., Huh, NH.
  • Journal Title: Biochem.Biophys.Res.Commun. 400(1) Pages: 175-180
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Transcriptional regulation of a brown adipocyte-specificgene, UCP1, by KLF11 and KLF15 (2010)
  • Author(s): Yamamoto, K., Sakaguchi, M., Medina, R.J., Niida, A., Sakaguchi, Y., Miyazaki, M., Kataoka, K., Huh, N.H.
  • Journal Title: Biochem.Biophys.Res.Commun. Volume: 400 Pages: 175-180
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Binding and internalization of Clostridium botulinuR C2 toxin (2009)
  • Author(s): Nagahama.M., Hagiyama.T., Kojima.T., Aoyanagi, K., Takahashi, C., Oda, M., Sakaguchi.Y., Oguma.K., Sakurai, J.
  • Journal Title: Infection and Immunity 77(11) Pages: 51395148-51395148
  • Peer Reviewed
• [Presentation] ボツリヌス菌ホスホリパーゼCの酵素活性と生物活性, BMB2010 (2010)
  • Author(s): 阪口義彦, 小田真隆, Ni Nengah DwiFatmawati, 山本由弥子, 唐澤忠宏, 小林敬子, 永浜政博, 櫻井純, 小熊惠二
  • Organizer: 第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会合同大会
  • Place of Presentation: 神戸ポートアイランド(神戸)
• [Presentation] 多機能受容体RAGEの下流信号伝達機構の解明, BMB2010 (2010)
  • Author(s): 阪口政清, 村田等, 山本健一, 小野智之, 阪口義彦, 本山晃, 日比野利彦, 片岡健, 許南浩
  • Organizer: 第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会合同大会
  • Place of Presentation: 神戸ポートアイランド(神戸)
• [Presentation] A型ボツリヌス神経毒素の三叉神経節培養細胞への結合と取り込み (2010)
  • Author(s): 山本由弥子, 張凱, Ni Nengah DwiFatmawati, 申蓮花, 馬少博, 阪口義彦, 鈴木智典, 小熊惠二
  • Organizer: 第63回日本細菌学会中国・四国支部総会
  • Place of Presentation: 松山大学(松山市)
• [Presentation] ボツリヌス菌ホスホリパーゼCの酵素活性と生物活性 (2010)
  • Author(s): 阪口義彦, 小田真隆, Ni Nengah DwiFatmawati, 山本由弥子, 難波ひかる, 唐澤忠宏, 小林敬子, 永浜政博, 櫻井純, 小熊惠二
  • Organizer: 第57回トキシンシンポジウム
  • Place of Presentation: 長浜ロイヤルホテル(滋賀)<招待講演>
• [Presentation] C型とD型ボツリヌス毒素を支配するバクテリオファージのゲノム解析 (2010)
  • Author(s): 阪口義彦
  • Organizer: 第3回ファージ研究会
  • Place of Presentation: 大阪大学蛋白質研究所(大阪)
• [Presentation] ボツリヌス菌ホスホリパーゼCの酵素活性と生物活性 (2010)
  • Author(s): 阪口義彦, 小田真隆, Ni Nengah Dwi Fatmawati, 山本由弥子, 難波ひかる, 唐澤忠宏, 小林敬子, 永浜政博, 櫻井純, 小熊恵二
  • Organizer: 第57回トキシンシンポジウム
  • Place of Presentation: 長浜ロイヤルホテル(滋賀)
• [Presentation] ボツリヌス菌ホスホリパーゼCの酵素活性と生物活性 (2010)
  • Author(s): 阪口義彦, 小田真隆, Ni Nengah Dwi Fatmawati, 山本由弥子, 唐澤忠宏, 小林敬子, 永浜政博, 櫻井純, 小熊恵二
  • Organizer: BMB2010,第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会 合同大会
  • Place of Presentation: 神戸ポートアイランド(神戸)
• [Presentation] 多機能受容体RAGEの下流信号伝達機構の解明 (2010)
  • Author(s): 阪口政清, 村田等, 山本健一, 小野智之, 阪口義彦, 本山晃, 日比野利彦, 片岡健, 許南浩
  • Organizer: BMB2010,第33回日本分子生物学会年会・第83回日本生化学会大会 合同大会
  • Place of Presentation: 神戸ポートアイランド(神戸)
• [Presentation] G型ボツリヌス毒素遺伝子をコードするプラスミドの解析 (2010)
  • Author(s): 阪口義彦, 林哲也, 中山恵介, 山本由弥子, 難波ひかる, 細見晃司, 幸田知子, 向本雅郁, 小崎俊司, 小熊恵二
  • Organizer: 第4回 日本ゲノム微生物学会年会
  • Place of Presentation: 九州大学医学部キャンパス百年講堂(福岡)
• [Presentation] G型ボツリヌス毒素遺伝子をコードするプラスミドの解析 (2010)
  • Author(s): 阪口義彦, 林哲也, 山本由弥子, 難波ひかる, 中山恵介, 馬少博, 張凱, 幸田知子, 小崎俊司, 小熊恵二
  • Organizer: 第83回 日本細菌学会総会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜(横浜)
• [Presentation] ボツリヌス菌C2毒素によるPI3K/Aktシグナル伝達系の活性化とエンドサイトーシスにおける役割 (2010)
  • Author(s): 小林敬子, 高橋千尋, 永浜政博, 青柳晃平, 小田真隆, 小熊恵二, 阪口義彦, 櫻井純
  • Organizer: 第83回 日本細菌学会総会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜(横浜)
• [Presentation] C型とD型ポツリヌスC2毒素遺伝子をコードするプラスミドの解析 (2009)
  • Author(s): 阪口義彦, 林哲也, 山本由弥子, 中山恵介, 馬少博, 張凱, 田村臣哉, 小熊恵二
  • Organizer: 第56回 トキシン(毒素)シンポジウム
  • Place of Presentation: アルモニーテラッセ(岐阜)
• [Presentation] ボツリヌス菌C2毒素のエンドサイトーシスにおけるPI3K/Aktシグナル伝達系の役割 (2009)
  • Author(s): 高橘千尋, 永浜政博, 青柳晃平, 小林敬子, 小田真隆, 小熊恵二, 阪口義彦, 櫻井純
  • Organizer: 第56回 トキシン(毒素)シンポジウム
  • Place of Presentation: アルモニーテラッセ(岐阜)
• [Presentation] G型ボツリヌス毒素遺伝子をコードするプラスミドの解析 (2009)
  • Author(s): 阪口義彦, 林哲也, 山本由弥子, 難波ひかる, 中山恵介, 馬少博, 張凱, 田村臣哉, 小熊恵二
  • Organizer: 第62回 日本細菌学会中国・四国支部総会
  • Place of Presentation: 広島大学霞キャンパス広仁会館(広島)
• [Presentation] コレラに対するニワトリ抗体(IgY)の有用性(第2報) (2009)
  • Author(s): 平井一行, 衛藤友美, 長町榮子, 綾田潔, 山本由弥子, 阪口義彦, 横田憲治, 小熊恵二
  • Organizer: 第62回 日本細菌学会中国・四国支部総会
  • Place of Presentation: 広島大学霞キャンパス広仁会館(広島)
• [Presentation] MOLECULAR ANALYSIS OF AN EXTRACHROMOSOMAL ELEMENT CONTAINING THE C2 TOXIN GENE DICOVERED IN CLOSTRIDIUM BOTULINUN TYPE C (2009)
  • Author(s): Y.Sakaguchi, T.Hayashi, Y.Yamamoto, H.Namba, K.Nakayama, K.Zhang, S.Ma E.Nagamachi, K.Oguma
  • Organizer: 6th ClostPath International Conference
  • Place of Presentation: Istituto Superiore diSanita. Rome (Italy)
• [Presentation] C型とD型ボッリヌス菌ボスホリパーゼCの酵素活性と生物活性 (2009)
  • Author(s): 阪口義彦, 小田真隆, 山本由弥子, 難波ひかる, 馬少博, 張凱, 田村臣哉, 唐澤忠宏, 小林敬子, 永浜政博, 櫻井純, 小熊恵二
  • Organizer: 第32回 日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜(横浜)
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