RNAアプタマーを用いた白血病細胞特異的ドラッグデリバリーシステムの開発

• Project/Area Number: 21790915
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Hematology
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 植田 康敬 Osaka University, 医学部附属病院, その他 (30533848)
• Project Period (FY): 2009 – 2011
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2011)
• Budget Amount: ¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000); Fiscal Year 2011: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000); Fiscal Year 2010: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000); Fiscal Year 2009: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000)
• Keywords: 急性骨髄性白血病 / 葉酸受容体 / 白血病幹細胞 / RNAアプタマー / SELEX

Research Abstract

急性骨髄性白血病を含む多くのガンで特異的に発現するとされている、葉酸レセプターであるFR-βをターゲットに、si-RNAなどを腫瘍細胞特異的にデリバリーするシステムの構築を目指し、FR-βに対するアプタマーの開発を継続して行っている。CELL SELEXを行うために、まずFR-βを発現した細胞の調整を試みた。これまでFR-β、Flag-tagged FR-βを遺伝子導入したCHO cellにおいて、mRNAレベルでの発現は確認できたものの、市販の抗体を用いてのウェスタンブロッティングではタンパクレベルの発現は確認できなかった。この細胞を用いてCELL SELEXを6サイクル行ったが、目的とするアプタマーの濃縮は認められなかった。そこで本年は、KG-1、K562細胞にも同様に遺伝子を導入し、遺伝子レベルでの発現を確認した上で、いずれの導入した細胞でも別の市販抗体も使用しウェスタンブロッティングを行ったが、やはりタンパクレベルでのFR-β発現は確認できなかった。抗Flag抗体にてタンパクレベルでの発現は確認できたので、これらの細胞を用いて同様にCELL SELEXを行ったが、目的とするアプタマーの濃縮は得られなかった。今後も適切な抗FR-β抗体を検索する予定である。また細胞を用いたCELL SELEXではなく、標的のタンパクを直接使用するSELEXを行うため、CHO cellにFlag-tagged FR-βを導入し、カラムを用いてタンパクの抽出を行った。今後このタンパクの品質を確認し、SELEXを行う予定である。

Research Products

• [Presentation] 肺腺癌を合併した慢性骨髄性白血病に対する、Niotinib・Gefitinib併用の経験 (2010)
  • Author(s): 福島健太郎、植田康敬, ら
  • Organizer: 第8回日本臨床腫瘍学会学術集会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2010-03-19
• [Presentation] ATG減量投与を用いた前処置による同種移植合併症の検討 (2010)
  • Author(s): 松井崇浩、植田康敬, ら
  • Organizer: 第32回日本造血細胞移植学会総会
  • Place of Presentation: 静岡県浜松市
  • Year and Date: 2010-02-20
• [Presentation] 180日以上を経て致命的な急性GVHDを発症したHLA不一致非血縁者間同種骨髄移植症例 (2009)
  • Author(s): 木田亨、植田康敬, ら
  • Organizer: 第92回近畿血液学地方会
  • Place of Presentation: 京都
  • Year and Date: 2009-12-12
• [Book] Annual Review血液2011 (2011)
  • Author(s): 植田康敬(共著)
  • Publisher: 中外医学社