| Project/Area Number |
21H02658
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 48010:Anatomy-related
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
原田 彰宏 大阪大学, 大学院医学系研究科, 教授 (40251441)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
吉村 信一郎 大阪大学, 大学院医学系研究科, 講師 (60584521)
森脇 健太 東邦大学, 医学部, 准教授 (70778068)
國井 政孝 大阪大学, 大学院医学系研究科, 助教 (80614768)
鷲見 拓哉 大阪大学, 大学院医学系研究科, 助教 (80836883)
苅田 聡 大阪大学, 大学院医学系研究科, 助教 (50883526)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥17,290,000 (Direct Cost: ¥13,300,000、Indirect Cost: ¥3,990,000)
Fiscal Year 2023: ¥5,850,000 (Direct Cost: ¥4,500,000、Indirect Cost: ¥1,350,000)
Fiscal Year 2022: ¥5,460,000 (Direct Cost: ¥4,200,000、Indirect Cost: ¥1,260,000)
Fiscal Year 2021: ¥5,980,000 (Direct Cost: ¥4,600,000、Indirect Cost: ¥1,380,000)
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| Keywords | 細胞極性 / 細胞極性 / 極性輸送 / 極性輸送 / 上皮細胞 / Rab |
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| Outline of Research at the Start |
１．極性輸送の組織、個体における機能：この疑問に対し、研究１、２を行う。（研究１）apical面への極性輸送に必要なEHBP1L1のKOマウスでは赤血球の脱核に異常が生じるため、apical面への極性輸送と脱核過程の共通性を解明する。（研究２）apical面への輸送に重要な他の遺伝子（syntaxin3, Rab10等）のKOマウスを解析し、apical輸送の生体内での他の機能を解析する。
２．apical面の蛋白の選別の分子機構の解明（研究３）：我々はEHBP1L1の結合蛋白CD2APに結合し、apicalに分布する蛋白の選別に関与する候補蛋白Xを同定したためその解析を行う。
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| Outline of Annual Research Achievements |
（研究１）Rab8結合蛋白EHBP1L1に関する研究：EHBP1L1のKOマウスでは赤芽球の脱核に異常が生じ非常に重篤な貧血を呈した。今年度は以下の解析を行い脱核の分子機構の解明を行った。１．EHBP1L1の上流（Rab8, 10）、下流分子（Bin1, dynamin）のKO, KDにより脱核の異常が生じるか検討を行った。２．イヌのEHBP1L1遺伝子の異常で筋細胞の異常が生じるため、同様の異常がマウスでも生じるか解析した。
（研究２）apical面への輸送に重要な他の遺伝子のKOマウスを解析し、apical輸送の生体での他の機能を解析した。：１．我々は小腸特異的syntaxin3 KOマウスにおいて、小腸上皮細胞の増殖亢進という表現型を見出したため以下A,Bを行った。A.KOと野生型の小腸でmRNAの種類と発現量をRNAseqやmicroarrayによって比較し、KOマウスで増殖因子の発現が亢進することを発見した。B.小腸organoidの培養で in vivoの現象が再現可能であることを確認し、増殖因子の分泌に必要な分子のknockdownによる解析を行った。２．Rab10について：Rab10 KOマウスは胎生致死のため小腸特異的KOマウスを作製したが、特に異常が見られなかった。そのため全身で時期特異的にRab10をKO出来るマウスを作製中である。
（研究３）EHBP1L1結合蛋白に関する研究：我々はEHBP1L1の結合蛋白としてCD2APを同定し、さらにCD2APの結合蛋白として、アクチン結合タンパク質（WASPファミリータンパク質）を同定したため、その局在などを解析した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
概要に記したような実験は概ね問題なく進み、結果も得られているため。
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| Strategy for Future Research Activity |
（研究１）Rab8結合蛋白EHBP1L1に関する研究：１．EHBP1L1の上流下流分子、CD2AP等のKO, KDにより脱核の異常が生じるか検討する。２．KOマウスの筋細胞で異常が生じるか解析する。
（研究２）A．小腸特異的syntaxin3 KOマウスで増殖因子の転写分泌が亢進するかを解明したため、organoidを用いてその分子機構について調べ、論文にまとめる。
B.Rab10の小腸特異的KOマウスには特に異常が見られなかったため、全身で時期特異的にKOできるマウスを作製し、どの組織でRab10が必要になるかを解明する。
（研究３）EHBP1L1の結合蛋白としてCD2APを同定し、さらにCD2APの結合蛋白として、apical面の膜蛋白質に結合する可能性のあるWASPファミリータンパク質を同定したため、これがapical面の細胞膜に局在する膜蛋白質と結合するか否か、またどのドメインが重要か解明する。
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