Single cell analysis of TCR genotypes of CTL at recovery phase of acute Dengue infection
| Project/Area Number |
21H02969
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 54030:Infectious disease medicine-related
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
平山 謙二 長崎大学, 熱帯医学・グローバルヘルス研究科, 教授 (60189868)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
水上 修作 長崎大学, 熱帯医学研究所, 准教授 (00508971)
グエン フイティエン 長崎大学, 熱帯医学・グローバルヘルス研究科, 准教授 (20457526)
谷本 幸介 長崎大学, 熱帯医学・グローバルヘルス研究科, 客員研究員 (60611613)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥17,550,000 (Direct Cost: ¥13,500,000、Indirect Cost: ¥4,050,000)
Fiscal Year 2023: ¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2022: ¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2021: ¥9,230,000 (Direct Cost: ¥7,100,000、Indirect Cost: ¥2,130,000)
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| Keywords | デング熱 / T細胞レセプター遺伝子 / 細胞障害性T細胞 / エフェクター細胞 / メモリー細胞 / T細胞受容体 / シングルセル解析 / 急性期 / 回復期 / 遺伝子発現解析 |
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| Outline of Research at the Start |
本研究ではデング熱の急性感染回復期に末梢血で増加したT細胞群に注目し、すでに確立している病院コホートのチームワークを基礎に、流行地の2次医療病院をベースに急性患者の回復期の採血を行い、デングウイルスで特異的に活性化したT細胞群のT細胞レセプターのレパトア解析をシングルセル技術を駆使して行う。デング感染によって引き起こされる細胞性防御反応を引き起こす抗原分子が明らかになることで、抗体だけではなく細胞性免疫を刺激できる新しいタイプのワクチンの開発へと発展させることができる。
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| Outline of Annual Research Achievements |
令和３年４月に開始した本研究は、以下の２つのステップで進める計画であった。
１．デング熱患者の採血と末梢血リンパ球分離・保存（令和３年）
２．分離したリンパ球のシングルセルｍRNA発現解析（令和４－５年）
採血の開始は当初の予定よりも大幅に遅れたが、その大きな理由はマニラでの新型コロナの大流行とロックダウンの長期化であった。令和４年度にマニラの研究所の附属病院で最初の患者の採血が行われ、最終的には令和５年度のはじめまでに予定していた採血と細胞の保存が完了した。この遅れに伴い、当初令和４年に予定していたシングルセル解析が令和５年度に繰り越されることになり、予備実験も含め令和５年度の前半までかかって、当初の予定分の作業を完了した。１５名の採血から、HLA型や重症化の有無などを考慮して厳選した４名の患者の、急性期から回復期の３回の時点での末梢血リンパ球中のCD8陽性細胞障害性T細胞のシングルセル分析が、本研究で立てた計画に従うことで可能であることが明らかになった。特に問題だったのは、凍結保存のステップによるバイアビリティーの低下の可能性であったが、この点ではほぼ半年の保存期間でもほぼ９０％以上の生存率で、その後の精製のステップにも耐えられるものであることが分かった。終了年度である令和5年度に予定していたシングルセル解析は年度内に完了し、予定していたすべての情報を一定の満足できる範囲の精度で得ることができたと考察している。デング熱の急性期、回復期における患者の末梢血中の細胞障害性T細胞のT細胞レセプターの配列情報をもとにしたクロノタイプの同定とそれらの３か月間のｍRNA発現レベルの動態観察による免疫記憶メカニズムの解明に向けて、実験モデルを確立することができた。
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| Research Progress Status |
令和5年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和5年度が最終年度であるため、記入しない。
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Report
(3 results)
Research Products
(1 results)
