Development of the novel therapy for NAFLD by Engineering Fatty Liver from iPS cells
Project/Area Number |
21H03004
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Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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Allocation Type | Single-year Grants |
Section | 一般 |
Review Section |
Basic Section 55020:Digestive surgery-related
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Research Institution | Kyushu University |
Principal Investigator |
武石 一樹 九州大学, 大学病院, 特別教員 (50733713)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
三森 功士 九州大学, 大学病院, 教授 (50322748)
吉住 朋晴 九州大学, 医学研究院, 教授 (80363373)
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Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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Budget Amount *help |
¥17,290,000 (Direct Cost: ¥13,300,000、Indirect Cost: ¥3,990,000)
Fiscal Year 2023: ¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000)
Fiscal Year 2022: ¥6,760,000 (Direct Cost: ¥5,200,000、Indirect Cost: ¥1,560,000)
Fiscal Year 2021: ¥6,240,000 (Direct Cost: ¥4,800,000、Indirect Cost: ¥1,440,000)
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Keywords | iPS細胞 / 非アルコール性脂肪性肝炎 / 肝硬変 / 星細胞 / PNPLA3 / 脂肪肝 / NASH / 人工肝臓 / iPS / 肝がん |
Outline of Research at the Start |
脂肪肝が増加しており、肝硬変や肝細胞癌の原因となっているが、脂肪肝の有効な治療法はないPNPLA3 遺伝子異常が脂肪肝や肝細胞癌発癌との関連が報告された。今回、iPS細胞を用いて、PNPLA3遺伝子異常が脂肪肝を発症するメカニズムを追求し、脂肪肝の新しい治療法を確立することで、肝臓病や肝臓癌の発症を抑えることを目標とする。
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Outline of Annual Research Achievements |
iPS細胞よりPNPLA3遺伝子の野生型からCRISP技術を用いて、PNPLA3の遺伝子配列の1塩基配列を変え、変異株の作成に成功した。この変異株は、他の遺伝子配列については、全く同じ配列であることを確認しているので、この2つのiPS細胞の違いはこの1塩基配列のちがいから起こるものであると考えられる。iPS細胞を6日間、成長因子と培養することで、星細胞に分化させることに成功した。この作成した星細胞を免疫染色およびq PCRにて遺伝子発現を検討すると、星細胞のマーカーであるαSMAやCollagen1の発言を認め、野生株および変異株にてその発現では差を認めず、を作成した。 野生株および変異株ともに星細胞へ分化させて、星細胞マーカーの発現を検討したところ、分化に差は認めなかった。 分化後の二つの細胞をTGFにて刺激すると、変異株の星細胞が強く活性化し、増殖速度も速くなることがわかった。さらに、変異株はCollagen1の発現が高くなり、線維化マーカーの発現が高くなった。 2つの細胞株をRNAシークエンスを行うと、変異株の星細胞において、肝線維化に関わる線維化マーカーや、炎症性サイトカインの発生に関わる遺伝子の発現が高くなることがわかった。 変異株の星細胞にて、IL-6の遺伝子発現が高くなることがわかった。IL-6は炎症性サイトカインにて、星細胞での線維化に関わっていることがわかっており、変異株の培養液中のIL-6を測定すると、発現量が高くなっていることがわかった。 以上より、変異株の星細胞は、野生株よりもより強く活性化し、線維化に関わる遺伝子群の発現が高く、IL-6の炎症性サイトカインが高くなることがわかった。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
RNAシークエンスを行い、網羅的解析ができた。この結果をもとに遺伝子に着目して、治療ターゲットとなる因子を抽出することができる。
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Strategy for Future Research Activity |
RNAシークエンスの結果より2から3個の遺伝子の候補が抽出できている。この遺伝子について、発現の違い、下流のカスケードの検討、治療薬の開発を行っていく予定。
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Report
(2 results)
Research Products
(12 results)