Whlole genome analysis in exosome from dilated cardiomyopathy occurred by aging
Project/Area Number |
21H03358
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Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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Allocation Type | Single-year Grants |
Section | 一般 |
Review Section |
Basic Section 59040:Nutrition science and health science-related
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Research Institution | Yamaguchi University |
Principal Investigator |
水上 洋一 山口大学, 大学研究推進機構, 教授 (80274158)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
諌山 慧士朗 山口大学, 大学研究推進機構, 助教 (30780887)
森本 幸生 国際医療福祉大学, 福岡保健医療学部, 教授 (50202362)
渡邉 健司 山口大学, 大学研究推進機構, 助教 (50711264)
大塚 正人 東海大学, 医学部, 教授 (90372945)
小林 茂樹 山口大学, 医学部, 教授(連携講座) (90397993)
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Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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Budget Amount *help |
¥17,290,000 (Direct Cost: ¥13,300,000、Indirect Cost: ¥3,990,000)
Fiscal Year 2023: ¥6,240,000 (Direct Cost: ¥4,800,000、Indirect Cost: ¥1,440,000)
Fiscal Year 2022: ¥6,240,000 (Direct Cost: ¥4,800,000、Indirect Cost: ¥1,440,000)
Fiscal Year 2021: ¥4,810,000 (Direct Cost: ¥3,700,000、Indirect Cost: ¥1,110,000)
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Keywords | 拡張型心筋症 / エクソソーム / 次世代シーケンス解析 / 分泌小胞 / 全遺伝子解析 / ゲノム編集マウス / 心筋症 / ゲノム解析 / ゲノム編集 |
Outline of Research at the Start |
心臓は特定細胞での変異シグナルが心臓内に伝達されるため、半数を占める後天的な心筋症は、バイオプシーで変異遺伝子を検出することが困難である。近年、疾患組織の遺伝子状態が分泌小胞(exosome)に放出されることが明らかになった。分泌小胞の全遺伝子発現解析(exosome-NGS)に取組み15000遺伝子の検出技術を確立した。この技術で、心筋症再現マウスのexosome-NGSデータと疾患の全遺伝子発現解析から多変量解析を用いて疾患との相関を明らかにする。また、心筋症患者さんの臨床サンプルで検証し、後天的心筋症の診断技術を確立する。
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Outline of Annual Research Achievements |
ヒトは老化に伴い、様々な病気の発症頻度が急激に増加する。心臓は24時間働き続けており加齢の影響が出やすく、心拍数の多さが寿命に関係していると言われている。実際に加齢に伴って心筋症や不整脈など心疾患が増加している。これらの疾患は、DNA変異が関与していることがわかってきており、遺伝性と後天的(孤発性)変異のケースがある。遺伝性の拡張型心筋症は親族の病歴や血液ゲノムの解析から疾患変異が解析されている。しかし、後天的な遺伝子変異の解析は量の関係で不可能であった。研究代表者らは0.2mgの組織から高純度のゲノムDNAを数ng抽出に成功したが、微量のため全ゲノム遺伝子解析はできなかった。そこで過去の心筋症原因遺伝子と報告された2987領域に対するプライマーを設計し、次世代シーケンサーで変異遺伝子を同定した。さらに蛋白質をコードしている領域すべてに対するプライマーで増幅し変異を解析する技術を確立した。その結果、新規の孤発性心筋症特異的な遺伝子変異を発見した。この変異が拡張型心筋症を発症するか検証するため、マウス個体のゲノム編集技術であるi-GONAD法を確立し、この心筋症変異マウスで拡張型心筋症の再現に成功した。しかし、この技術では全ての後天的心筋症の原因遺伝子を行うことができず、抜本的な診断手法の改善が求められる。分泌される小胞(exosome)に存在する癌遺伝子変異が存在することが報告されていることから、分泌小胞内に全遺伝子解析技術の検討を行った。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
分泌されるエクソソームがあまりにも微量でエクソソーム分取が従来の方法で上手く取得できず、条件検討を見直す必要がある。
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Strategy for Future Research Activity |
分取前にエクソソームを定量できる装置で分泌量を正確に測定し、回収および遺伝子解析を実施する。
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Report
(1 results)
Research Products
(7 results)
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[Journal Article] GRP78 Antibodies Are Associated With Blood-Brain Barrier Breakdown in Anti-Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein Antibody-Associated Disorder2021
Author(s)
Shimizu F, Ogawa R, Mizukami Y, Watanabe K, Hara K, Kadono C, Takahashi T, Misu T, Takeshita Y, Sano Y, Fujisawa M, Maeda T, Nakashima I, Fujihara K, Kanda T.
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Journal Title
Neurol Neuroimmunol Neuroinflamm
Volume: 9
Issue: 1
DOI
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Peer Reviewed / Open Access
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