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Exploration of estrogen feedback mechanisms regulating animal reproduction to improve the methods controlling ovulation and follicle development in domestic animals

Research Project

Project/Area Number 21H05031
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (S)

Allocation TypeSingle-year Grants
Review Section Broad Section F
Research InstitutionNagoya University

Principal Investigator

束村 博子  名古屋大学, 生命農学研究科, 特任教授 (00212051)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 大蔵 聡  名古屋大学, 生命農学研究科, 教授 (20263163)
平林 真澄  大学共同利用機関法人自然科学研究機構(機構直轄研究施設), 生命創成探究センター, 研究員 (20353435)
羽田 真悟  帯広畜産大学, 畜産学部, 准教授 (40553441)
真方 文絵  帯広畜産大学, 畜産学部, 准教授 (50635208)
渡辺 雄貴  日本獣医生命科学大学, 応用生命科学部, 助教 (50781788)
中村 翔  名古屋大学, アジアサテライトキャンパス学院(農), 特任准教授 (50829223)
上野山 賀久  名古屋大学, 生命農学研究科, 准教授 (70324382)
大石 真也  京都薬科大学, 薬学部, 教授 (80381739)
井上 直子  名古屋大学, 生命農学研究科, 准教授 (90377789)
Project Period (FY) 2021-07-05 – 2026-03-31
Project Status Granted (Fiscal Year 2025)
Budget Amount *help
¥194,350,000 (Direct Cost: ¥149,500,000、Indirect Cost: ¥44,850,000)
Fiscal Year 2025: ¥27,560,000 (Direct Cost: ¥21,200,000、Indirect Cost: ¥6,360,000)
Fiscal Year 2024: ¥27,560,000 (Direct Cost: ¥21,200,000、Indirect Cost: ¥6,360,000)
Fiscal Year 2023: ¥27,560,000 (Direct Cost: ¥21,200,000、Indirect Cost: ¥6,360,000)
Fiscal Year 2022: ¥28,470,000 (Direct Cost: ¥21,900,000、Indirect Cost: ¥6,570,000)
Fiscal Year 2021: ¥83,200,000 (Direct Cost: ¥64,000,000、Indirect Cost: ¥19,200,000)
Keywordsキスペプチン / エストロゲン / 視床下部 / 遺伝子改変ラット / 家畜(ウシ・ヤギ) / 家畜(ウシ・ヤギ) / 卵胞発育・排卵制御 / 家畜の繁殖促進技術 / 生殖中枢キスペプチンニューロン / 性腺刺激ホルモン放出ホルモン(GnRH) / 黄体形成ホルモン(LH) / 弓状核 / 前腹側室周囲核(AVPV)
Outline of Research at the Start

家畜やヒトを含む哺乳類メスにおける卵胞発育と排卵を制御するエストロゲンのフィードバック機構に着目し、卵胞発育を支配する負のフィードバック、および排卵を支配する正のフィードバックによる性腺刺激ホルモン分泌制御の分子メカニズムの解明とその応用の検証を目的とする。生殖機能中枢であるキスペプチンニューロンでのキスペプチン遺伝子発現とその分泌に対するエストロゲンの促進・抑制作用を、2つの神経核に局在するキスペプチンニューロンにおける神経核特異的な転写因子、受容体、分泌制御因子等の作用による制御の解明により明らかとし、家畜における実証研究により、排卵・卵胞発育障害などに対する治療法の開発に資する。

Outline of Annual Research Achievements

本研究は、哺乳類メスにおける「排卵」と「卵胞発育」を制御するエストロゲンの正と負のフィードバックのメカニズムを、生殖中枢キスペプチンニューロンに着目して解明し、ラットなどモデル動物で得られた知見をヤギ・ウシなど家畜に活用し新たな繁殖制御法の開発に資することを目的とする。2022年度には、エストロゲンの正と負のフィードバックの分子機構の解明に資するキスペプチンニューロン常時可視化ラットを用いて、エストロゲンがキスペプチンニューロンにおける遺伝子発現に及ぼす影響をRNA-seqにより網羅的に解析し、エストロゲンに応答して発現が変動する遺伝子リストを得た。また、エストロゲンの負のフィードバックを担う卵胞中枢弓状核キスペプチンニューロンを抑制的に制御する因子として、ソマトスタチン、ダイノルフィン、およびエンケファリンニューロンの役割を明らかにした。具体的には、低濃度エストロゲン処置をした卵巣除去ラットにおいて、低栄養や泌乳による黄体形成ホルモン(LH)のパルス状分泌の抑制をソマトスタチン、ダイノルフィン、あるいはエンケファリン受容体拮抗剤が阻害することを示し、これらの抑制性ニューロンが泌乳ラット(乳牛モデル)の卵胞発育中枢の抑制を仲介することを明らかにした。また、エストロゲンの正のフィードバック作用を担う前腹側室周囲核(AVPV)キスペプチンニューロンをATP-プリン作動性受容体シグナリングが活性化し、排卵を制御することを明らかにした。具体的には、ラットのAVPV領域にATPを投与するとサージ様のLH分泌を誘起する一方で、同領域にプリン作動性受容体拮抗剤を投与するとLHサージおよび排卵が抑制されることを明らかに下。加えて、ウシの子宮内膜症モデルとして子宮内にLPSを投与したラットにおいて卵胞発育中枢のKiss1発現およびLH分泌を抑制することを明らかにした。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

当初計画の殆どの実験において、順調に研究が進捗し、当初の計画を上回る大きな成果が得られた。具体的には、エストロゲンの負のフィードバックを担う卵胞中枢弓状核キスペプチンニューロンを抑制的に制御する因子として、低栄養時や泌乳ラットにおいて、ソマトスタチン、ダイノルフィン、およびエンケファリンニューロンの役割を明らかにし、さらに子宮内膜症モデルラットにおけるLPSの卵胞発育中枢キスペプチンニューロンへの抑制効果を明らかにした。加えて、前腹側室周囲核(AVPV)キスペプチンニューロンをATP-プリン作動性受容体シグナリングが活性化し、排卵を制御することを明らかするなど、排卵不全をもたらすメカニズムを明らかにした点で、中枢性排卵障害の治療技術開発に資する知見として大きな意義を有する。その一方で、コロナの影響等により、一部の資材が予定通り入手できず、一部の実験(in vivo Ca2+イメージング解析の研究等)の実施が遅れたため、これに関わる予算を繰り越した点を勘案し、「概ね順調に進展している」と評価した。

Strategy for Future Research Activity

作製に成功したキスペプチンニューロン常時可視化ラットを活用し、エストロゲン処置・無処置のラットから赤色蛍光を指標として細胞を単離回収し、この細胞のRNA-seqにより遺伝子発現を網羅的に解析しつつある。これにより、キスペプチンニューロンにおいて、エストロゲンに応答して発現が変動する遺伝子リストや、弓状核あるいはAVPVのキスペプチンンニューロンで特異的に発現が高い遺伝子リストを得つつある。これらの遺伝子リストより、有力な候補遺伝子(受容体、転写活性因子など)を選抜し、それらの生理的な役割を、ラットをモデルとして明らかにする。このため、ラットを用いて候補因子の拮抗薬や作動薬の脳内投与が、脳内Kiss1発現、キスペプチンニューロンの活動、およびLH分泌に及ぼす効果を明らかにする。さらに、現有のKiss1-Creラットを活用し、弓状核やAVPVへ候補転写因子のshRNAを投与し、脳内Kiss1発現、キスペプチンニューロンの活動、およびLH分泌に及ぼす効果を明らかにする。また、ヤギを用いて、弓状核における多ニューロン発火活動(MUA)によりGnRHパルスジェネレータの活動をモニターしつつ、ラットで得られた有力な候補因子を脳内投与し、MUAへの効果を確かめ、候補因子を絞り込む。加えて、ウシにおける繁殖障害の状況を調査し、候補因子の繁殖機能への効果を明らかにするための準備を行う。

Assessment Rating
Interim Assessment Comments (Rating)

A: In light of the aim of introducing the research area into the research categories, the expected progress has been made in research.

Report

(6 results)
  • 2023 Abstract (Interim Assessment) ( PDF )   Interim Assessment (Comments) ( PDF )
  • 2022 Annual Research Report
  • 2021 Abstract ( PDF )   Comments on the Screening Results ( PDF )   Annual Research Report
  • Research Products

    (77 results)

All 2023 2022 2021

All Journal Article (20 results) (of which Int'l Joint Research: 5 results,  Peer Reviewed: 20 results,  Open Access: 19 results) Presentation (57 results) (of which Int'l Joint Research: 14 results,  Invited: 6 results)

  • [Journal Article] Enkephalin-δ opioid receptor signaling mediates glucoprivic suppression of LH pulse and gluconeogenesis in female rats2023

    • Author(s)
      Tsuchida Hitomi、Nonogaki Miku、Takizawa Marina、Inoue Naoko、Uenoyama Yoshihisa、Tsukamura Hiroko
    • Journal Title

      Endocrinology

      Volume: 164 Issue: 3

    • DOI

      10.1210/endocr/bqac216

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    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Hindbrain adenosine 5-triphosphate (ATP)-purinergic signaling triggers LH surge and ovulation via activation of AVPV kisspeptin neurons in rats2023

    • Author(s)
      Inoue Naoko、Hazim Safiullah、Tsuchida Hitomi、Dohi Yuri、Ishigaki Ren、Takahashi Ai、Otsuka Yuki、Yamada Koki、Uenoyama Yoshihisa、Tsukamura Hiroko
    • Journal Title

      The Journal of Neuroscience

      Volume: 43 Issue: 12 Pages: 2140-2152

    • DOI

      10.1523/jneurosci.1496-22.2023

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    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Central somatostatin-somatostatin receptor 2 signaling mediates lactational suppression of luteinizing hormone release via the inhibition of glutamatergic interneurons during late lactation in rats2022

    • Author(s)
      Sugimoto Arisa, Tsuchida Hitomi, Nagae Mayuko, Inoue Naoko, Uenoyama Yoshihisa, Tsukamura Hiroko
    • Journal Title

      Journal of Reproduction and Development

      Volume: 68 Issue: 3 Pages: 190-197

    • DOI

      10.1262/jrd.2022-009

    • ISSN
      0916-8818, 1348-4400
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    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Opioidergic pathways and kisspeptin in the regulation of female reproduction in mammals2022

    • Author(s)
      Uenoyama Yoshihisa、Tsuchida Hitomi、Nagae Mayuko、Inoue Naoko、Tsukamura Hiroko
    • Journal Title

      Frontiers in Neuroscience2022

      Volume: 16

    • DOI

      10.3389/fnins.2022.958377

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    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Establishment of embryo transfer in the musk shrew (<i>Suncus murinus</i>)2022

    • Author(s)
      INOUE Naoko、HOTTA Akinori、GOTO Teppei、HIRABAYASHI Masumi、UENOYAMA Yoshihisa、TSUKAMURA Hiroko
    • Journal Title

      Journal of Reproduction and Development

      Volume: 68 Issue: 5 Pages: 340-344

    • DOI

      10.1262/jrd.2022-003

    • ISSN
      0916-8818, 1348-4400
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    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Intrauterine LPS inhibited arcuate Kiss1 expression, LH pulses, and ovarian function in rats.2022

    • Author(s)
      Magata F, Toda L, Sato M, Sakono T, Chambers JK, Uchida K, Tsukamura H, Matsuda F.
    • Journal Title

      Reproduction

      Volume: 164(5) Issue: 5 Pages: 207-219

    • DOI

      10.1530/rep-22-0047

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    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Dynorphin-κ-opioid receptor signaling, but not μ-opioid receptor signaling, partly mediates the suppression of luteinizing hormone release during late lactation in rats2022

    • Author(s)
      Tsuchida Hitomi、Nonogaki Miku、Inoue Naoko、Uenoyama Yoshihisa、Tsukamura Hiroko
    • Journal Title

      Neuroscience Letters

      Volume: 791 Pages: 136920-136920

    • DOI

      10.1016/j.neulet.2022.136920

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  • [Journal Article] Intronic Enhancer Is Essential for Nr5a1 Expression in the Pituitary Gonadotrope and for Postnatal Development of Male Reproductive Organs in a Mouse Model2022

    • Author(s)
      Shima Yuichi、Miyabayashi Kanako、Mori Takami、Ono Koji、Kajimoto Mizuki、Cho Hae Lim、Tsuchida Hitomi、Uenoyama Yoshihisa、Tsukamura Hiroko、Suzuki Kentaro、Choi Man Ho、Toida Kazunori
    • Journal Title

      International Journal of Molecular Sciences

      Volume: 24 Issue: 1 Pages: 192-192

    • DOI

      10.3390/ijms24010192

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    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Kisspeptin neurons as a key player bridging the endocrine system and sexual behavior in mammals2022

    • Author(s)
      Nakamura Sho、Watanabe Youki、Goto Teppei、Ikegami Kana、Inoue Naoko、Uenoyama Yoshihisa、Tsukamura Hiroko
    • Journal Title

      Frontiers in Neuroendocrinology

      Volume: 64 Pages: 100952-100952

    • DOI

      10.1016/j.yfrne.2021.100952

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    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Cellular and molecular mechanisms regulating the KNDy neuronal activities to generate and modulate GnRH pulse in mammals2022

    • Author(s)
      Ikegami Kana、Watanabe Youki、Nakamura Sho、Goto Teppei、Inoue Naoko、Uenoyama Yoshihisa、Tsukamura Hiroko
    • Journal Title

      Frontiers in Neuroendocrinology

      Volume: 64 Pages: 100968-100968

    • DOI

      10.1016/j.yfrne.2021.100968

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    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] <i>Kiss1</i>-dependent and independent release of luteinizing hormone and testosterone in perinatal male rats2022

    • Author(s)
      Chen Jing、Minabe Shiori、Munetomo Arisa、Magata Fumie、Sato Marimo、Nakamura Sho、Hirabayashi Masumi、Ishihara Yasuhiro、Yamazaki Takeshi、Uenoyama Yoshihisa、Tsukamura Hiroko、Matsuda Fuko
    • Journal Title

      Endocrine Journal

      Volume: 69 Issue: 7 Pages: 797-807

    • DOI

      10.1507/endocrj.EJ21-0620

    • NAID

      130008157963

    • ISSN
      0918-8959, 1348-4540
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  • [Journal Article] Generation of Tfap2c‐T2A‐tdTomato knock‐in reporter rats via adeno‐associated virus‐mediated efficient gene targeting2022

    • Author(s)
      Oikawa Mami、Nagae Mayuko、Mizuno Naoaki、Iwatsuki Kenyu、Yoshida Fumika、Inoue Naoko、Uenoyama Yoshihisa、Tsukamura Hiroko、Nakauchi Hiromitsu、Hirabayashi Masumi、Kobayashi Toshihiro
    • Journal Title

      Molecular Reproduction and Development

      Volume: 89 Issue: 3 Pages: 129-132

    • DOI

      10.1002/mrd.23562

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  • [Journal Article] Reduction of arcuate kappa-opioid receptor-expressing cells increased luteinizing hormone pulse frequency in female rats2021

    • Author(s)
      Dai Mingdao、Nakamura Sho、Takahashi Chudai、Sato Marimo、Munetomo Arisa、Magata Fumie、Uenoyama Yoshihisa、Tsukamura Hiroko、Matsuda Fuko
    • Journal Title

      Endocrine Journal

      Volume: 68 Issue: 8 Pages: 933-941

    • DOI

      10.1507/endocrj.EJ20-0832

    • NAID

      130008079310

    • ISSN
      0918-8959, 1348-4540
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      2021 Annual Research Report
    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] Effect of diet-induced obesty Kiss1/Tac3/Pdyn gene expression in the arcuate nucleus and luteinizing hormone secretion in sex hormone-primed male and female rats.2021

    • Author(s)
      10.10.16/j.peptides.2021.170546
    • Journal Title

      Peptides

      Volume: in press Pages: 170546-170546

    • DOI

      10.1016/j.peptides.2021.170546

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    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Testosterone regulation on quiescin sulfhydryl oxidase 2 synthesis in the epididymis2021

    • Author(s)
      Wang Tse-En、Minabe Shiori、Matsuda Fuko、Li Sheng-Hsiang、Tsukamura Hiroko、Maeda Kei-Ichiro、Smith Lee、O’Hara Laura、Gadella Bart M、Tsai Pei-Shiue
    • Journal Title

      Reproduction

      Volume: 161 Issue: 5 Pages: 593-602

    • DOI

      10.1530/rep-20-0629

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  • [Journal Article] Morphological Analysis of the Hindbrain Glucose Sensor-Hypothalamic Neural Pathway Activated by Hindbrain Glucoprivation2021

    • Author(s)
      Sato Marimo、Minabe Shiori、Sakono Takahiro、Magata Fumie、Nakamura Sho、Watanabe Youki、Inoue Naoko、Uenoyama Yoshihisa、Tsukamura Hiroko、Matsuda Fuko
    • Journal Title

      Endocrinology

      Volume: 162 Issue: 9 Pages: 1-18

    • DOI

      10.1210/endocr/bqab125

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  • [Journal Article] Kisspeptin Neurons and Estrogen?Estrogen Receptor α Signaling: Unraveling the Mystery of Steroid Feedback System Regulating Mammalian Reproduction2021

    • Author(s)
      Uenoyama Yoshihisa、Inoue Naoko、Nakamura Sho、Tsukamura Hiroko
    • Journal Title

      International Journal of Molecular Sciences

      Volume: 22 Issue: 17 Pages: 9229-9229

    • DOI

      10.3390/ijms22179229

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  • [Journal Article] Role of KNDy neurons expressing kisspeptin, neurokinin B, and dynorphin A as a GnRH pulse generator controlling mammalian reproduction.2021

    • Author(s)
      Uenoyama Y, Nagae M, Tsuchida H, Inoue N, Tsukamura H.
    • Journal Title

      Frontiers in Endocrinology.

      Volume: 12 Pages: 1-12

    • DOI

      10.3389/fendo.2021.724632

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  • [Journal Article] Central μ-Opioid Receptor Antagonism Blocks Glucoprivic LH Pulse Suppression and Gluconeogenesis/Feeding in Female Rats2021

    • Author(s)
      Tsuchida Hitomi、Kawai Narumi、Yamada Koki、Takizawa Marina、Inoue Naoko、Uenoyama Yoshihisa、Tsukamura Hiroko
    • Journal Title

      Endocrinology

      Volume: 162 Issue: 10 Pages: 1-12

    • DOI

      10.1210/endocr/bqab140

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      2021 Annual Research Report
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  • [Journal Article] Kobayashi Award 2019: The neuroendocrine regulation of the mammalian reproduction.2021

    • Author(s)
      Tsukamura H.
    • Journal Title

      General and Comparative Endocrinology

      Volume: 315 Pages: 113755-113755

    • DOI

      10.1016/j.ygcen.2021.113755

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  • [Presentation] KNDy neurones and GnRH/LH pulse generation.2022

    • Author(s)
      Hiroko Tsukamura, Yoshihisa UENOYAMA.
    • Organizer
      ICN2022
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  • [Presentation] Involvement of central dynorphin and β-endorphin signaling in glucoprivic LH pulse suppression and gluconeogenesis/feeding2022

    • Author(s)
      Hitomi TSUCHIDA、Naoko INOUE、Yoshihisa UENOYAMA、Hiroko TSUKAMUTA
    • Organizer
      Kisspeptin 2022
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  • [Presentation] KNDy neurons maintain gonadotropin pulses and folliculogenesis as the GnRH pulse generator.2022

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      Mayuko Nagae, Yoshihisa Uenoyama, Hitomi Tsuchida, Masumi Hirabayashi, Naoko Inoue, Hiroko Tsukamura
    • Organizer
      Kisspeptin 2022
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  • [Presentation] Histological analysis of visualized Kiss1 neurons using newly generated Kiss1-Cre rats2022

    • Author(s)
      Koki Yamada, Mayuko Nagae, Tetsuya Mano, Naoko Inoue, Yoshihisa Uenoyama, Masumi Hirabayashi, Hiroko Tsukamura
    • Organizer
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    • Author(s)
      Hitomi TSUCHIDA、Naoko INOUE、Yoshihisa UENOYAMA、Hiroko TSUKAMUTA
    • Organizer
      ICN2022
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  • [Presentation] KNDy neurons maintain gonadotropin pulses and folliculogenesis as the GnRH pulse generator.2022

    • Author(s)
      Mayuko Nagae, Yoshihisa Uenoyama, Hitomi Tsuchida, Masumi Hirabayashi, Naoko Inoue, Hiroko Tsukamura
    • Organizer
      ICN2022
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  • [Presentation] Histological analysis of visualized Kiss1 neurons using newly generated Kiss1-Cre rats2022

    • Author(s)
      Koki Yamada, Mayuko Nagae, Tetsuya Mano, Naoko Inoue, Yoshihisa Uenoyama, Masumi Hirabayashi, Hiroko Tsukamura
    • Organizer
      ICN2022
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  • [Presentation] KNDy neurons: the gonadotropin-releasing hormone (GnRH) pulse generator in mammals2022

    • Author(s)
      Uenoyama Y, Inoue N, Tsukamura H.
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      19thAAAP
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  • [Presentation] κ-オピオイド受容体発現細胞特異的Kiss1ノックアウト雌ラットの生殖機能解析2022

    • Author(s)
      長江 麻佑子,榎本 悠希,米谷 麻里,平林 真澄,井上 直子,上野山 賀久,束村 博子
    • Organizer
      第115回 日本繁殖生物学会大会
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Published: 2021-07-08   Modified: 2025-06-20  

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