| Project/Area Number |
21J10881
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| Research Category |
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Section | 国内 |
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| Review Section |
Basic Section 57070:Developmental dentistry-related
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
村田 早羅 九州大学, 歯学府, 特別研究員(DC2)
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| Project Period (FY) |
2021-04-28 – 2023-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2022)
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| Budget Amount *help |
¥1,500,000 (Direct Cost: ¥1,500,000)
Fiscal Year 2022: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
Fiscal Year 2021: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
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| Keywords | 細胞外小胞 / SHED / 軟骨細胞 / インテグリンβ1 / 細胞増殖 |
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| Outline of Research at the Start |
これまでの研究から、軟骨細胞に乳歯幹細胞(SHED)由来培養上清から抽出した細胞外小胞 (SHED-EV)を添加すると、軟骨細胞の増殖能およびテロメラーゼ活性は上昇することがわかった。
本研究の目的は、SHED-EV中の因子が軟骨細胞の増殖能を促進させるメカニズムの解明とする。SHED-EV添加後に変化する軟骨細胞のセルサイクルを制御するシグナル経路を解析し、テロメラーゼ活性促進との関連性を検討する。また、軟骨細胞増殖機構に影響を与えている因子を同定し、低身長等の骨格に異常をきたす疾患モデル軟骨細胞に対しSHED-EVやその構成因子の効果を検証し、新規治療法の糸口を見つけたい。
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| Outline of Annual Research Achievements |
ヒト乳歯幹細胞（stem cells from human exfoliated deciduous teeth(SHED) ）が放出する細胞外小胞（extracellular vesicles （EVs））をヒト軟骨細胞へ添加後、軟骨細胞の細胞内シグナル伝達の変化とその原因因子の探索を行った。
ウェスタンブロッティング解析によりSHEDのEVsの刺激後、軟骨細胞の細胞増殖に関係するERK MAPキナーゼ経路とβ-カテニン経路の活性化を認め、ウェスタンブロッティング解析およびフローサイトメトリー解析により軟骨細胞の増殖に関係する膜表面タンパク質であるインテグリンβ1の発現の上昇を認めた。
SHEDのEVsをRNase処理後、軟骨細胞を刺激しても未処理EVsと同様に細胞増殖を促進する結果となったことから、SHEDのEVsの軟骨細胞への影響についてEVs中のタンパク成分に着目した。まず、CRISPRCas9によりSHEDのインテグリンβ1ノックアウト細胞を作製し、ノックアウト細胞由来のEVsで軟骨細胞を刺激したところ、ウェスタンブロッティング解析により軟骨細胞のインテグリンβ1の発現に有意差を認めなかった。次に、SHEDと同様に軟骨細胞のインテグリンβ1ノックアウト細胞を作製した。インテグリンβ1ノックアウト軟骨細胞は未処理の軟骨細胞と比較してBrdU増殖試験により増殖能が低いことがわかった。SHEDのEVsで刺激したところ、BrdU増殖試験およびBrdUセルサイクルアッセイにより、インテグリンβ1ノックアウト軟骨細胞の増殖能は回復を示した。
よって、SHEDのEVs中のタンパク成分が軟骨細胞のインテグリンβ1のシグナルを補償または補填することによって、軟骨細胞の増殖能を促進することがわかった。
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| Research Progress Status |
令和4年度が最終年度であるため、記入しない。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和4年度が最終年度であるため、記入しない。
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