| Project/Area Number |
21J22755
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
|
| Allocation Type | Single-year Grants |
|---|
| Section | 国内 |
|---|
| Review Section |
Basic Section 43040:Biophysics-related
|
|---|
| Research Institution | The University of Tokyo |
|---|
Principal Investigator |
長坂 勇次郎 東京大学, 新領域創成科学研究科, 特別研究員(DC1)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2021-04-28 – 2024-03-31
|
| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2021)
|
| Budget Amount *help |
¥2,200,000 (Direct Cost: ¥2,200,000)
Fiscal Year 2021: ¥800,000 (Direct Cost: ¥800,000)
|
|---|
| Keywords | ロドプシン / ベストロフィン / パッチクランプ |
|---|
| Outline of Research at the Start |
微生物ロドプシンにおいて、光照射により細胞内外へイオンをポンプしたり、チャネルとしてイオンを透過する分子が報告されている。また微生物由来のベストロフィンはカチオンチャネル機能を持つことが知られている。本研究の概要は、メタゲノム解析により新たに発見されたロドプシンドメイン（Rhドメイン）とベストロフィンドメイン（Bestドメイン）を併せ持つ新奇遺伝子（RhBest）に着目し、RhBestがどのようなイオン輸送に関わるのか、またRhドメインを通じてどのようにイオン輸送が光依存的に制御されているのかなど、その機能や輸送メカニズムの解明を目的として電気生理学実験を行う研究である。
|
| Outline of Annual Research Achievements |
メタゲノム解析からロドプシンドメイン（Rhドメイン）とベストロフィンドメイン（Bestドメイン）を併せ持つ新奇遺伝子（RhBest）が緑藻や渦鞭毛藻などに広く分布していることが分かった。Rhドメインに巨大なイオンチャネルであるベストロフィンが融合したタンパク質はこれまでになく、RhBestがどのようなイオン輸送に関わるのかをパッチクランプ法を用いた電気生理学実験により明らかにすることを研究目的とした。
共同研究者であるイスラエル工科大学のOded Beja博士から提供された配列をもとに、緑藻または渦鞭毛藻由来の遺伝子コンストラクトを動物由来の培養細胞における形質膜発現に最適化した。次に、パッチクランプ法を用いて電気生理学実験を行ったところ測定したいずれのRhBestにおいても光電流は観測されなかった。その後可視光域の波長を変えながら光応答を確認したものの、いずれの波長の光にも応答しなかった。
Oded Beja博士から新たに提供された海洋性藻類由来のRhBest遺伝子に関して高速液体クロマトグラフィー測定を実施した。その結果、暗条件では大半が発色団としてall-trans型レチナールが分子内に結合していることが確認された。さらに、赤色光照射によってall-trans型レチナールの割合の減少とともに11-cis型のレチナールが蓄積していることが新たに明らかになった。これはRhBestへの光照射によってall-trans型から11-cis型への光異性化反応が起こっていることを示唆しており、これまで微生物ロドプシンで起こるall-trans型から13-cis型への光異性化とは異なることが分かった。
現在、申請者がHPLC測定を担当した海洋性藻類由来のRhBestに関する論文をNat. Struct. Mol. Biol.誌に投稿し受理された。
|
| Research Progress Status |
翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。
|
| Strategy for Future Research Activity |
翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。
|
