| Project/Area Number |
21K05938
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 42020:Veterinary medical science-related
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| Research Institution | University of Miyazaki |
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Principal Investigator |
今村 守一 宮崎大学, 医学部, 准教授 (10391442)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
岩丸 祥史 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構, 動物衛生研究部門, グループ長 (20355142)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
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| Keywords | プリオン / BSE / PMCA / 試験管内増幅 / 牛海綿状脳症 |
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| Outline of Research at the Start |
本研究は従来型牛海綿状脳症（定型BSE）の起源を明らかにすることを目的とする。研究には、PMCAと呼ばれる試験管内でプリオンを増幅できる技術を用いる。まず、定型BSEが反芻動物間の異種間伝達により生じた可能性を探るため、様々な反芻動物プリオンをシードとし、異種反芻動物プリオン蛋白質を基質としてPMCAを行い、定型BSEプリオンが生じるかを調べる。また、定型BSEは孤発的に発生した可能性も否定できない。そこで、牛組換えプリオン蛋白質を基質としたシードプリオンを加えないPMCA法により牛組換えプリオンを自発生成させ、定型BSEプリオンの性状と比較することで孤発的発生の可能性を検討する。
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| Outline of Annual Research Achievements |
本課題では、定型BSEの起源を明らかにすることを目的に１）プリオンの異種動物間伝達を模した、各種反芻類プリオンをシードとした試験管内増幅法（PMCA）によるプリオン様産物の生成、２）ウシ組換えPrPを基質としたPMCAによる組換えプリオンの自発生成を試みた。本年度はPMCAにより生成した、各種プリオン様プロテアーゼ抵抗性プリオン蛋白質(PrPres)の生化学的性状や感染性の有無等を調べた。
L型・H型BSEおよび定型・非定型スクレイピー、シカ慢性消耗病（CWD)プリオンをシードとし、ヒツジ(TgOv)およびウシ(TgBo)、ヒト(TgHu)正常型プリオン蛋白質（PrP）を発現する形質転換マウス脳乳剤を基質としてそれぞれPMCAを 行った。その結果、H型BSEおよび定型スクレイピー、CWDプリオンをシード、TgOvおよびTgBo、TgHu脳乳剤を基質とした場合、PrPresの生成が認められた。生成したPrPresについて生化学的性状解析およびバイオアッセイを行ったところ、H型BSEプリオンとTgOv脳乳剤の組み合わせ、H型BSEプリオンとTgHu脳乳剤の組み合わせで定型BSE様プリオンの生成が認められた。これらの結果は、H型プリオンは異種動物への伝達および順化の過程で定型BSEプリオン様に性状が変化すると考えられた。
昆虫細胞発現系で産生した組み換えウシPrPを基質としたシード非存在下におけるPMCAでウエスタンブロッティングによるバンドパターンが異なる複数のPrPresが自発生成した。そのうちのひとつのPrPresをTgBoマウスに接種した結果、プリオン病の症状を示し、脳内に異常型PrPの蓄積が認められた。これらの結果はBSEが孤発的に生成する可能性を示しており、定型BSEプリオンも自発生成したことを示唆している。
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Report
(3 results)
Research Products
(4 results)
