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非酸素発生型光合成細菌のPS Iタイプ反応中心の分子構築と反応機構の全容解明

Research Project

Project/Area Number 21K06112
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

Allocation TypeMulti-year Fund
Section一般
Review Section Basic Section 43040:Biophysics-related
Research InstitutionOsaka University

Principal Investigator

大岡 宏造  大阪大学, 全学教育推進機構, 教授 (30201966)

Project Period (FY) 2021-04-01 – 2025-03-31
Project Status Granted (Fiscal Year 2023)
Budget Amount *help
¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
Keywords光合成 / 反応中心 / エネルギー移動 / 電荷分離 / 超高速分光 / ヘリオバクテリア / 緑色イオウ細菌 / 電子移動 / キノン / NMR / タイプ1 / ホモダイマー
Outline of Research at the Start

本研究では、ヘリオバクテリアおよび緑色イオウ細菌のもつPS Iタイプ反応中心の完全な分子構築を解析し、構造機能相関に基づいてエネルギー移動機構および特異な電子移動経路を解明する。具体的には以下の研究項目について推進する予定である。
【1】ヘリオバクテリアHbt. modesticaldumおよび緑色イオウ細菌Cba. Tepidumに由来する反応中心の結晶化あるいはクライオ電子顕微鏡による構造解析
【2】ヘリオバクテリア反応中心のキノン結合部位周辺の分子環境をフーリエ変換赤外分光法により探索
【3】ヘリオバクテリア反応中心の超高速分光によるエネルギー移動および電子移動過程の解析

Outline of Annual Research Achievements

1.超高速分光によるヘリオバクテリア反応中心におけるエネルギー移動過程の解析
反応中心はPshAとPshXサブユニットの2組から構成され、含まれる光合成色素(54個のBChl g, 4個のBchl g’, 2個のOH-Chl a, 2個のカロテノイド(Car))が対称的に配置されているのが特徴である。PshXサブユニットは膜1回貫通の小サブユニットであり、2個のBChl gを配位している。今年度は、この変異株をK.E. Redding教授(米国)から入手し、PshX欠失反応中心における色素間励起エネルギー移動の反応過程を超高速分光による解析を行った。
最初に低温140K下、波長820 nmでBChl gのQyピークの裾野を選択的に励起した。グローバル解析の結果、野生型反応中心に見られていたCarのphotochromic-band shiftの強度が小さくなり、電荷分離形成反応の効率も僅かに減少することが分かった。また電荷分離状態との相互作用に由来すると考えていたCarのelectrochromic-band shiftは完全に消失してしまった。さらにCarを490nmで選択的に励起したところ、野生型反応中心と比較して電荷分離形成能は著しく減少することが分かった。PshXサブユニットを欠失した変異反応中心には2個のCarが含まれているが、本来とは異なる位置に存在し、効率的なエネルギー移動に関与していないことが明らかになった。
2.コヒーレント分光による解析の試み
ヘリオバクテリアRCのコヒーレント分光による解析を試みた。検出波長666 nm(A0)では非常に短い時間(100フェムト秒程度)においてコヒーレンスが観測された。A0と強く分子間相互作用するBChl gの存在が示唆され、その候補としてAccまたはBChl g-27が挙げられた。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

1: Research has progressed more than it was originally planned.

Reason

本研究ではヘリオバクテリア反応中心における色素間励起エネルギー移動および初期電荷分離形成までの反応過程を100フェムト秒ポンプ・プローブ分光法という超高速分光を用いることで追跡し、立体構造情報を基盤に反応の素過程を分子レベルで詳細に記述することに成功している。そして始原型光合成反応におけるエネルギー変換過程の特性について、重要かつ新たな知見が蓄積されつつある。
一年目はカロテノイドの近くに長波長吸収帯を構成するBmd812とBmd787のBChl g集団が存在することを明らかにし,P800にエネルギーを渡すアンテナ色素として機能していることを示した。また二年目は816 nmに吸収を示す長波長アンテナ色素red-BChl gに励起エネルギーが一旦移動した後、初期電荷分離過程が始まることを明らかにすることができた。さらに三年目にはPshXサブユニットに結合する2個のBChl gが近傍Carとの励起子相互作用により近赤外光の光エネルギーを効率的に利用する機能を有することを明らかにした。
このように本研究目的である「光合成細菌のもつタイプ1反応中心の分子構築と反応機構の全容解明」に向けて、非常に素晴らしい研究成果が得られている。

Strategy for Future Research Activity

ヘリオバクテリア反応中心の超高速分光によるエネルギー移動および電子移動過程の解析は非常に順調に進んでいる。カロテノイドからアンテナBChl gへの高効率の励起エネルギー移動に関しては、昨年度に得られた野生型反応中心に対し、今年度に新たに得られたPshX欠失反応中心のデータと比較しながら投稿論文としてまとめる予定である。ヘリオバクテリア反応中心に特異的に存在するPshXサブユニットの機能について議論することが可能である。また新たに低温(140 K)での測定を行ったことで、過去に行った室温での測定結果と比較することが必要となり、励起エネルギー移動から初期電荷分離までの過程を詳細に検討した。長波長アンテナ色素red-BChl gの存在が明らかとなり、初期電荷分離に至る過程に関する投稿論文を準備することを考えている。
さらにK.E. Redding教授(米国)からは,他に2種類の変異株を譲り受けており、来年度に分光測定を進める予定である。一つはP800二量体に配位するHisをGlnやSerに置換した変異RC株であり、光合成的に生育することが分かっている。もう一つはA0成分(BChl g)と水素結合しているSer545、Ser553 をそれぞれHis、Ala に置換した変異RC株であり、電荷分離状態形成が70%に減少することが分かっている。変異RCタンパクを調製後、サブピコ秒からナノ秒の時間領域の過渡吸収変化を詳細に観察し、初期電荷分離状態がP800とAccのどちらのコファクターから始まるのか、その形成過程について明らかにしていく予定である。

Report

(3 results)
  • 2023 Research-status Report
  • 2022 Research-status Report
  • 2021 Research-status Report
  • Research Products

    (23 results)

All 2024 2023 2022 2021 Other

All Int'l Joint Research (1 results) Journal Article (4 results) (of which Peer Reviewed: 4 results,  Open Access: 2 results) Presentation (16 results) (of which Int'l Joint Research: 5 results) Book (1 results) Remarks (1 results)

  • [Int'l Joint Research] Arizona State University(米国)

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      Kimura Akihiro、Kitoh-Nishioka Hirotaka、Kondo Toru、Oh-oka Hirozo、Itoh Shigeru、Azai Chihiro
    • Journal Title

      The Journal of Physical Chemistry B

      Volume: 128 Issue: 3 Pages: 731-743

    • DOI

      10.1021/acs.jpcb.3c07424

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      Kishimoto Hiraku、Azai Chihiro、Yamamoto Tomoya、Mutoh Risa、Nakaniwa Tetsuko、Tanaka Hideaki、Miyanoiri Yohei、Kurisu Genji、Oh-oka Hirozo
    • Journal Title

      Current Research in Structural Biology

      Volume: 5 Pages: 100101-100101

    • DOI

      10.1016/j.crstbi.2023.100101

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    • Author(s)
      Yamaki Kouya、Ohta Kiyoe、Kobayashi Norihiro、Morita Izumi、Kiguchi Yuki、Oyama Hiroyuki、Ito Ken、Nanbo Asuka、Oh-oka Hirozo、Koyama Yutaka、Kawata Yoshiki、Fujisawa Hirotaka、Ohta Mitsuhiro
    • Journal Title

      Biological and Pharmaceutical Bulletin

      Volume: 45 Issue: 8 Pages: 1022-1026

    • DOI

      10.1248/bpb.b22-00220

    • ISSN
      0918-6158, 1347-5215
    • Year and Date
      2022-08-01
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    • Journal Title

      The Journal of Chemical Physics

      Volume: 156 Issue: 10 Pages: 105102-105102

    • DOI

      10.1063/5.0077290

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      第59回日本生物物理学会年会
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  • [Book] 光合成2021

    • Author(s)
      日本光合成学会
    • Total Pages
      224
    • Publisher
      朝倉書店
    • ISBN
      9784254171761
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  • [Remarks] 光合成反応の分子機構

    • URL

      https://www.bio.sci.osaka-u.ac.jp/~ohoka/index.html

    • Related Report
      2023 Research-status Report 2022 Research-status Report 2021 Research-status Report

URL: 

Published: 2021-04-28   Modified: 2024-12-25  

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