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Epigenetic study of influenza A virus RNA polymerase

Research Project

Project/Area Number 21K06569
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

Allocation TypeMulti-year Fund
Section一般
Review Section Basic Section 47030:Pharmaceutical hygiene and biochemistry-related
Research InstitutionTokushima Bunri University

Principal Investigator

葛原 隆  徳島文理大学, 薬学部, 教授 (00260513)

Project Period (FY) 2021-04-01 – 2025-03-31
Project Status Granted (Fiscal Year 2023)
Budget Amount *help
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Keywordsインフルエンザウイルス / RNAポリメラーゼ / PA / エンドヌクレアーゼ / アセチル化 / ヒストンアセチル化酵素 / PCAF / GCN5 / エピジェネティクス / ヌクレオプロテイン
Outline of Research at the Start

インフルエンザはスペイン風邪の流行時に4000万人が死亡している。抗インフルエンザ薬としては、ノイラミニダーゼ阻害薬などが使われているが、ウイルスの遺伝子は容易に変異し、薬剤耐性ウイルスの出現などの問題がある。本研究では、新しい作用標的として、インフルエンザウイルスRNA合成酵素のアセチル化=エピジェネティックスに注目した。これまでに申請者はウイルスにおいてもエピジェネティクスがあることを提唱してきている。今回はインフルエンザウイルスのRNA合成酵素がアセチル化されると考え、そのメカニズムの解明と機能の解析を行う。これを標的として、これまでとは異なる新規な抗インフルエンザ化合物の探索を行う。

Outline of Annual Research Achievements

インフルエンザは現在でも重要な感染症であり、保存性が高く変異が起こりにくいインフルエンザウイルスのRNAポリメラーゼは新規の抗インフルエンザ創薬の非常に良い標的と考えられる。このRNAポリメラーゼは 3種のサブユニットPA, PB1, PB2で構成され、そのうちPAはエンドヌクレアーゼ活性により宿主mRNAから5’-capを含む十数塩基を切り取り、プライマーとして利用することでウイルスのmRNAが合成される。私どもの研究グループは、大腸菌により発現・精製したPAの組換えタンパク質がヒトのアセチル化酵素PCAFとGCN5によってアセチル化され、PAのエンドヌクレアーゼ活性が制御されることを報告した。質量分析によりPAの19番目のリジン残基(K19)がアセチル化標的であることを示唆し、K19をグルタミン(K19Q)と アルギニン(K19R)に変異させたところアセチル化レベルが減少した。興味深いことに、アセチル化リジンを模倣するK19Q変異によりエンドヌクレアーゼ活性が制御され、K19アセチル化の重要性が示唆された。去年までに、さらに質量分析の結果を再検討したところ、新たにK104とK158もアセチル化修飾部位であることを見出した。そこで、本報告では、K104とK158を単独でグルタミンまたはアルギニンに変異させた組換えタンパク質、およびK19・K104・K158の2か所以上のリジンを組み合わせてアルギニンに変異させた組換えタンパク質を作成した。そして、そのうちK104RおよびK104Qの変異を有する組換えタンパク質を用いて、アセチル化レベルの変化を解析した。その結果、どちらの組換えタンパク質もアセチル化レベルの減弱が観察され、K104もアセチル化の標的であることを生化学的に明らかにした。本年は、K19とそれらの変異を組み合わせた各種の複合変異組換えPAタンパク質の作成を行った。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

本年度はインフルエンザAウイルスのRNA依存RNAポリメラーゼのPAサブユニットにおいて、K19だけでなく、K104・K158という複数箇所の新規アセチル化部位の複合的な変異を有するPAタンパク質を作成しつつあるため。

Strategy for Future Research Activity

インフルエンザPAエンドヌクレアーゼ中に、新たにアセチル化部位として見出したK104とK158を単独でグルタミンまたはアルギニンに変異させた組換えタンパク質、およびK19・K104・K158の2か所以上の複数のリジンを組み合わせてグルタミンまたはアルギニンに変異させた組換えタンパク質を大腸菌を用いて発現、精製し、アセチル化の解析、さらにそのエンドヌクレアーゼなどの機能に対する解析を行う。アセチル化レベルとエンドヌクレアーゼ活性の変化、ウイルスへの効果を解析していく。

Report

(3 results)
  • 2023 Research-status Report
  • 2022 Research-status Report
  • 2021 Research-status Report
  • Research Products

    (26 results)

All 2024 2023 2022 2021 Other

All Journal Article (9 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Peer Reviewed: 7 results,  Open Access: 6 results) Presentation (10 results) Book (1 results) Remarks (6 results)

  • [Journal Article] Bakuchiol targets mitochondrial proteins, prohibitins and voltage-dependent anion channels: New insights into developing antiviral agents2024

    • Author(s)
      Shoji Masaki、Esumi Tomoyuki、Masuda Takeshi、Tanaka Narue、Okamoto Risa、Sato Hinako、Watanabe Mihiro、Takahashi Etsuhisa、Kido Hiroshi、Ohtsuki Sumio、Kuzuhara Takashi
    • Journal Title

      Journal of Biological Chemistry

      Volume: 300 Issue: 2 Pages: 105632-105632

    • DOI

      10.1016/j.jbc.2024.105632

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  • [Journal Article] Anti-influenza Activity of Povidone-Iodine-Integrated Materials2023

    • Author(s)
      Shoji Masaki、Ichihashi Kenta、Sriwilaijaroen Nongluk、Mayumi Haruka、Morikane Shinji、Takahashi Etsuhisa、Kido Hiroshi、Suzuki Yasuo、Takeda Kazuyoshi、Kuzuhara Takashi
    • Journal Title

      Biological and Pharmaceutical Bulletin

      Volume: 46 Issue: 9 Pages: 1231-1239

    • DOI

      10.1248/bpb.b23-00161

    • ISSN
      0918-6158, 1347-5215
    • Year and Date
      2023-09-01
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    • Author(s)
      Shoji Masaki、Kuzuhara Takashi
    • Journal Title

      Methods Mol Biol .

      Volume: 2582 Pages: 269-280

    • DOI

      10.1007/978-1-0716-2744-0_18

    • ISBN
      9781071627433, 9781071627440
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    • Author(s)
      Shoji Masaki、Okamoto Risa、Unno Taishi、Harada Kenichi、Kubo Miwa、Fukuyama Yoshiyasu、Kuzuhara Takashi
    • Journal Title

      Biological and Pharmaceutical Bulletin

      Volume: 45 Issue: 12 Pages: 1784-1790

    • DOI

      10.1248/bpb.b22-00474

    • ISSN
      0918-6158, 1347-5215
    • Year and Date
      2022-12-01
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    • Author(s)
      畠山大、庄司正樹、葛原隆
    • Journal Title

      Precision Medicine

      Volume: 5 Pages: 77-83

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      Hatakeyama Dai、Sunada Hiroshi、Totani Yuki、Watanabe Takayuki、Fellet?r Ildik?、Fitchett Adam、Eravci Murat、Anagnostopoulou Aikaterini、Miki Ryosuke、Kuzuhara Takashi、Kemenes Ildik?、Ito Etsuro、Kemenes Gy?rgy
    • Journal Title

      bioRxiv

      Volume: -

    • DOI

      10.1101/2021.05.26.445902

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    • Author(s)
      Hatakeyama Dai、Shoji Masaki、Ogata Seiryo、Masuda Takeshi、Nakano Masahiro、Komatsu Tsugunori、Saitoh Ayaka、Makiyama Kyoko、Tsuneishi Hazuki、Miyatake Asuka、Takahira Mizuki、Nishikawa Erina、Ohkubo Ayana、Noda Takeshi、Kawaoka Yoshihiro、Ohtsuki Sumio、Kuzuhara Takashi
    • Journal Title

      The FEBS Journal

      Volume: 289 Issue: 1 Pages: 231-245

    • DOI

      10.1111/febs.16123

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    • Author(s)
      Hatakeyama Dai、Masuda Takeshi、Miki Ryosuke、Ohtsuki Sumio、Kuzuhara Takashi
    • Journal Title

      Biochemical and Biophysical Research Communications

      Volume: 557 Pages: 273-279

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2021.03.173

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    • Author(s)
      庄司正樹、永渕楓華、由利優心、長瀬早咲、原貴史、吉開会美、福中彩子、藤谷与士夫、Heloisa G. dos Santos、深田俊幸、葛原隆
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  • [Book] Preparation of recombinant PA endonuclease domain protein of influenza A virus and its application for glycobiology research. Methods Mol Biol., 2556, 69-782022

    • Author(s)
      Takashi Kuzuhara
    • Total Pages
      10
    • Publisher
      Humana, New York, NY
    • ISBN
      9781071626344
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      https://p.bunri-u.ac.jp/laboratory/lab/lab08/

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      https://p.bunri-u.ac.jp/english/358/

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    • URL

      http://p.bunri-u.ac.jp/lab08/publication.html

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Published: 2021-04-28   Modified: 2024-12-25  

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