| Project/Area Number |
21K07045
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 49060:Virology-related
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| Research Institution | Kanazawa Medical University |
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Principal Investigator |
OKUWA Takako 金沢医科大学, 医学部, 助教 (20460347)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
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| Keywords | Saffold virus / 感染受容体 / CRISPRスクリーニング / CRISPR/Cas9 / sgRNAライブラリー / サフォードウイルス |
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| Outline of Research at the Start |
これまでに、CRISPR/Cas9 システムを用いて サフォードウイルス (SAFV) 高感受性細胞の遺伝子を網羅的にノックアウトし、SAFV 非感受性となった細胞から感染受容体遺伝子の候補を抽出した。その候補遺伝子の解析の結果、SAFV の吸着・侵入の過程には候補遺伝子以外の宿主因子が関与していることが示唆された。本研究では、再びCRISPR/Cas9 システムを用いて、これまでに感染に関与することを明らかにした宿主因子以外の受容体遺伝子を同定する。最終的に、受容体の SAFV 遺伝子型特異性、組織分布を明らかにし、さらに、SAFV 病原性発現の分子機構を明らかにする。
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| Outline of Final Research Achievements |
We have previously selected Saffold virus (SAFV) receptor candidate genes by genome-wide knockout screening using the CRISPR/Cas9 system. Among these candidate genes, we found that heparan sulfate (HS) is important for SAFV infection based on analysis of genes involved in HS biosynthesis. Furthermore, to identify SAFV receptors that were thought to exist in addition to HS, we generated an HS-deficient HeLa cell line and performed a CRISPR screening using this cell line. We identified SAFV receptors other than HS among the candidate genes selected in this screening.
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| Academic Significance and Societal Importance of the Research Achievements |
SAFVは上気道炎、胃腸炎、手足口病様疾患、無菌性髄膜炎、脳炎、膵炎などの患者検体から検出されていることから、多様な疾患の原因になると考えられるが、これらの疾患がどのようにして引き起こされるのかは解明されていない。本研究では、SAFVの感染に重要な受容体を同定した。受容体分子の発現分布からSAFVの組織親和性が明らかになり、その組織の細胞株を用いてSAFVの高感度な検出・分離が可能となるだけでなく、感染細胞の解析により、SAFVの詳細な病原性発現の分子機構の解明に繋がることが期待される。
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