転写時間動態解析とCRISPRによる生体内でのFoxp3発現制御メカニズムの解明
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21K07082
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 49070:Immunology-related
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
小野 昌弘 熊本大学, ヒトレトロウイルス学共同研究センター, 特任教授 (60447951)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
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| Keywords | T細胞 / 転写 / 時間動態 / トランスジェネシス / 免疫学 / 転写因子 / T細胞分化 / 制御性T細胞 / CRISPR |
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| Outline of Research at the Start |
制御性T細胞は転写因子Foxp3のはたらきにより免疫反応を抑制する活性をもつ.しかし制御性T細胞が生体内でどのようなタイミングで抑制活性を発揮するのか、その動的な分子メカニズムは何かについては概ね不明である.このため申請者は蛍光タイマータンパクをレポーター遺伝子として用いて生体内での転写の時間動態を1細胞レベルで解析する技術Tockyを開発し，免疫反応中のT細胞におけるFoxp3転写動態の研究を進めてきた.
本研究は免疫反応中にFoxp3がどのような時間動態で制御されるかについて検討し、その基盤となる分子機序の解明を目指す.
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| Outline of Annual Research Achievements |
制御性T細胞(Treg)は転写因子Foxp3のはたらきにより免疫反応を抑制する活性をもつ.しかしTregが生体内でどのようなタイミングで抑制活性を発揮するのか、 その動的な分子メカニズムは何かについては概ね不明である.このため申請者は，蛍光Timerタンパクをレポーター遺伝子として用いて生体内での転写の時間動態 を1細胞レベルで解析する技術Tockyを開発し，生体内で免疫反応中のT細胞におけるFoxp3転写動態の研究を進めてきた. 本研究では，Foxp3の遺伝子制御領域によるFoxp3転写時間動態の制御メカニズムの解明を目指す.特に，Tregが抗原を認識すると，Treg内のFoxp3タンパクが Foxp3遺伝子制御領域に結合して転写を活性化(=自己転写制御ループを作動)させてTregの抑制活性を誘導するという仮説をTockyおよび分子生物学的実験により 検討，新規メカニズム解明を目指している。この目的の下、Foxp3-TockyマウスのCNS2配列をCRISPR編集により欠損させたマウス(Foxp3-TockyDCNS2)を使用し て，抗原によるT細胞免疫誘導モデル(接触性皮膚炎およびペプチド免疫)を解析し，生体内で免疫反応中にTregがどのようにして抑制活性を発揮する転写プログ ラムを成立させるかを解析している。特に，Tregが抗原刺激や炎症により活性化してエフェクターTregとなる際のFoxp3転写時間動態に焦点を当て，CNS2配列欠 損がFoxp3転写時間動態・エフェクターTregの表現型・機能に与える影響を、定常状態ならびに分化中のFoxp3動態ならびに抗原刺激モデルを使った抗原に反応性のFoxp3の制御を解析した。
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Report
(3 results)
Research Products
(7 results)
