| Project/Area Number |
21K07406
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 52010:General internal medicine-related
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| Research Institution | University of Occupational and Environmental Health, Japan |
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Principal Investigator |
中西 司 産業医科大学, 大学病院, 助教 (00772609)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
吉田 安宏 産業医科大学, 医学部, 准教授 (10309958)
塚田 順一 産業医科大学, 大学病院, 准教授 (20227367)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2025-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
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| Keywords | ATL / 薬剤耐性 / ステロイド / RNASeq / 白血病 / ステロイド 様抗がん剤 / FGビーズ / インフラマゾーム |
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| Outline of Research at the Start |
申請者らは初めて細胞株ではなく成人T細胞性白血病（ATL）患者より分離したリンパ球を用い、ステロイド骨格を持つ抗がん剤の効果を報告し、その際薬剤耐性機序の一端を報告した。本研究ではステロイド骨格を持つ種々薬剤耐性白血病細胞株の樹立から薬剤耐性に関与している分子群の同定を行い、実際に薬剤に結合するタンパク分子の同定を、ビーズ固定法により行う。最終的に、ステロイド骨格を持つ種々薬剤で処理した患者白血病細胞における標的分子の解析により、総合的にステロイド骨格薬剤に対する耐性機序の解明を行い、将来的に行われると期待される、薬剤投与の効果が見込まれる群の識別（個別化診療）に応用するための研究課題である。
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| Outline of Annual Research Achievements |
安定した耐性株の樹立を確認したのち、今年度はステロイド骨格トリテルペンの標的遺伝子群・及び薬剤耐性に関わる遺伝子群の解析を、対照群細胞株と薬剤耐性細胞株の2群についてRNASeqを行った。耐性株は最も安定して誘導できているMT-1細胞に絞って薬剤耐性に関する分子群の情報を網羅的に収集した。薬剤耐性株は、2 μMで処理後、3日目に回収したものを用い、RNAを調整した。対処群にはエタノール処理群を用いた。
対照群に対して、トリテルペン処理群で発現が増加した遺伝子が332で、減少した遺伝子が384であった。それらの結果をもとにKEGG Pathway 解析を行った。ヒトの疾患に関わるものが最も多く変化しており、予想通りpathway in cancerやdrug resistance経路で大きな変化が認められた。またenvironmental information processingに関するものも影響を受けていた。Biological processでは、response to stimulusでの変化が大きく、具体的にはMAPKシグナル経路やPI3K-Aktシグナル経路で増強されていた。
個々の分子を見てみると、PIK3-Rの発現上昇が認められていた。これは昨年報告したトリテルペンであるククルビタシンの標的タンパク酵素であるAktの上流分子であり、この点はとても興味深い。またその上流で機能するFAKも発現上昇がみられている。この分子は、他のガンにおいて薬剤耐性獲得に関与することが報告されていることから、FAK-PI3K-Aktの経路を詳細に検討することは薬剤耐性獲得のメカニズムを知るうえでとても重要であると考えられる。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
RNASeqの結果をベースに、薬剤耐性遺伝子の解明を目指したが、データ解析に若干難航したため、最終的な分子の同定にまでは至らなかったため。
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| Strategy for Future Research Activity |
昨年度に明らかになった薬剤耐性に関与するパスウェイを中心に阻害剤、siRNAシステムなどを用いて、更に標的分子を絞っていく計画である。
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