Elucidation of the pathophysiology of hyperacusis and development of treatment methods by functional analysis of the autism-related gene CNTN5
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21K07496
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 52030:Psychiatry-related
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| Research Institution | Niigata University |
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Principal Investigator |
江川 純 新潟大学, 医歯学総合研究科, 特任准教授 (80648527)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
霜田 靖 長岡技術科学大学, 工学研究科, 准教授 (00291154)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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| Budget Amount *help |
¥4,030,000 (Direct Cost: ¥3,100,000、Indirect Cost: ¥930,000)
Fiscal Year 2023: ¥910,000 (Direct Cost: ¥700,000、Indirect Cost: ¥210,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,950,000 (Direct Cost: ¥1,500,000、Indirect Cost: ¥450,000)
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| Keywords | 自閉スペクトラム症 / Contactin5 / ハイコンテントスクリーニング / 聴覚過敏 / High Content Screening |
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| Outline of Research at the Start |
自閉スペクトラム症(ASD)患者は聴覚過敏を示す場合が多いが、その病態は不明である。本研究では、有力なASDリスク遺伝子の中で聴覚神経系および機能との関連が最も示唆されている分子Contactin5(CNTN5)に着目する。Cntn5全欠損およびexon4（ヒトでこのexonおよび近傍配列に異常が複数認められている）欠損マウスを用いてCntn5の機能解析をすることにより聴覚過敏の発症メカニズムを解明および治療法の開発をすることを目的とする。
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| Outline of Annual Research Achievements |
Contactin5 (CNTN5)は、聴覚系において脳幹のグルタミン酸作動性ニューロンの発達に関与し、CNTN5 KOマウスで聴覚脳幹反応（ABR）の脳波潜時が延長していた(Toyoshima et al., Dev Biol, 2009) 。また、CNTN5および6の遺伝子変異を持つ自閉スペクトラム症 (Autism Spectrum Disorder; ASD)患者は聴覚過敏を持ち、ABRの脳波潜時の延長を認めた(Mercati et al., Mol Psychiatry, 2016)。CNTN5の全エクソンをカバーするように設計した22個のプライマーを用いて、ASD患者のDNAサンプルのexon sequenceをABI PRISM 3130 x l Genetic Analyzerで行う。ASD群で検出された変異についてTaqman法で健常コントロール群に存在するかを確認して、症例対照で頻度を比較する。それらの変異についてin silico解析でその変異の有害度を推測した。これまでに8個のミスセンス変異が同定されたが、そのうち２つ（rs778655565, rs186615197, rs771277271,rs757538847）がin silico解析（PolyPhen-2）によりDamagingと判定された。この4種の変異Cntn5-Fc融合タンパク溶液を作成し、培養神経細胞に添加して、その神経発達における影響を解析している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
COVID-19の影響によりシークエンス試薬やシークエンサー備品の輸送が遅れたため。
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| Strategy for Future Research Activity |
CNTN5のエクソンシークエンスにより同定されたミスセンス変異のうち、in silico解析により有害と判定された変異をプラスミドベクターを用いて培養神経細胞に導入して、神経突起長解析では3日間、シナプス解析では2週間、培養したのちに固定して、染色（神経突起マーカー：MAP2、前シナプスマーカー：Synaprophysin1、後シナプスマーカー：SHANK2）、細胞イメージアナライザー（CellInsight CX5）で神経突起長およびシナプス数を自動計測し、コントロールとそれぞれの濃度の平均値をt検定で比較。多重比較の補正（Bonferroni法）を行う。
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Report
(2 results)
Research Products
(11 results)
