| Project/Area Number |
21K07944
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 53010:Gastroenterology-related
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| Research Institution | Nagasaki University |
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Principal Investigator |
中尾 一彦 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 教授 (00264218)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
宮明 寿光 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 准教授 (20437891)
三馬 聡 長崎大学, 病院(医学系), 講師 (30437892)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
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| Keywords | 肝星細胞 / TGF-β / SOCS3 / STAT3 / DNA methyltransferase |
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| Outline of Research at the Start |
本研究ではサイトカインシグナル系であるIL-6/JAK2/STAT3に対して抑制的に作用するSOCS3が、サイトカインシグナル系であるTGF-β/SMADsによって誘導されるSOCS3遺伝子のメチル化によって持続的に抑制されることでSTAT3の恒常的活性化が起き星細胞の活性化が維持されるのではないかという仮説を検証する。よって、TGF-βにより肝星細胞に持続的活性化を誘導後、メチル化によるSOCS3の発現抑制とSTAT3の活性化が起きているか、それを阻止することで肝星細胞の持続的活性化を抑止することが出来るのかを検証する。マウス肝線維化モデルを用い、in vivoにおいても同様の検討を行う。
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| Outline of Annual Research Achievements |
ヒト肝星細胞株であるLX2細胞並びにHHSteCs細胞をTGF-β存在下で2継代以上培養することで両細胞に活性化（myofibroblast様形質転換）が誘導され、それが維持された。加えて、αSMAの発現、I型コラーゲン産生が確認された。JAK2-STAT3シグナルが肝星細胞の活性化に関与していることから、リガンドであるIL-6が肝星細胞の活性化にTGF-βと相加的に作用しうるか検討するため、TGF-βで活性化誘導した肝星細胞株にIL-6を添加したところ、IL-6濃度依存的にJAK2-STAT3シグナルの活性化が確認され、αSMA発現量、I型コラーゲン産生量も増加することが確認された。
一方、TGF-β によって活性化が維持された肝星細胞におけるSOCS3の発現量を活性化前と比較したところ、活性化肝星細胞においてSOCS3の発現低下が認められた。加えて、IL-6添加によるSOCS3の発現量変化も検討したところ、SOCS3の発現誘導は認めず、JAK2-STAT3シグナルに対するネガティブフィードバック経路が作動していないことが示唆された。そこで、SOCS3の発現低下ならびにフィードバック不応が、メチル化によるエピジェネティックな抑制であるかについて、以下の検討を行った。
メチル化によるエピジェネティックな抑制を明らかにするため、脱メチル化剤の5-aza処理を行うことでSOCS3の発現が回復するか否かを検討したところ、発現の回復とIL-6添加による発現誘導が認められた。同時にαSMA発現量、I型コラーゲン産生量の低下が認められた。次に、活性化前後のSOCS3遺伝子プロモーター領域のメチル化の解析により、メチル化部位の存在が示唆された。加えて、JAK2-STAT3シグナルの活性化により、DNA methyltransferaseの発現上昇を認めた。
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