B型肝炎の治療抵抗性および病態進展における免疫チェックポイント分子の関与

• Project/Area Number: 21K07989
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Section: 一般
• Review Section: Basic Section 53010:Gastroenterology-related
• Research Institution: Osaka Metropolitan University (2022-2023); Osaka City University (2021)
• Principal Investigator: 榎本 大 大阪公立大学, 大学院医学研究科, 准教授 (20423874)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): LE THITHANHTHUY 大阪公立大学, 大学院医学研究科, 特任講師 (10572175) ; 河田 則文 大阪公立大学, 大学院医学研究科, 教授 (30271191) ; 田守 昭博 大阪公立大学, 大学院医学研究科, 准教授 (30291595)
• Project Period (FY): 2021-04-01 – 2025-03-31
• Project Status: Granted (Fiscal Year 2023)
• Budget Amount: ¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000); Fiscal Year 2023: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000); Fiscal Year 2022: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000); Fiscal Year 2021: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
• Keywords: B型肝炎 / 抗ウイルス治療 / 核酸アナログ / インターフェロン / 免疫チェックポイント / 免疫チェックポイント分子

Outline of Research at the Start

B型肝炎ウイルス感染は慢性肝炎→肝硬変→肝細胞癌へ進展の主要原因である。現行治療（=核酸アナログ、IFN）でHBs抗原低下は困難であり、有効な併用療法が模索されている。一方、がん化学療法において免疫チェックポイント阻害剤によるパラダイム転換が起きている。
1) 免疫チェックポイント分子の調節異常が抗HBV治療に対する抵抗性に関与するか明らかにする。さらに治療効果の予測マーカーの開発や、治療抵抗性の機序解明から新規治療開発に繋げる
2) B型慢性肝疾患の進展過程で、がん免疫機構の破綻は肝発がんに関与するか明らかにする。さらに肝発がんを予測できるマーカーの同定や、病態進展に関わる免疫機序の解明に繋げる

Outline of Annual Research Achievements

核酸アナログ治療開始後の肝発癌リスクとして可溶性免疫チェックポイント分子を含めた宿主因子、ウイルス因子、肝線維化の関与を明らかにするため検討を追加した。対象は核酸アナログを1年以上投与したB型慢性肝疾患122例である。
結果として、1) 核酸アナログ開始後4.3(1.1-7.6)年で13例が発癌した。治療開始後の累積発癌率は、3/5/7/10年で4.6/9.1/13.2/15.0％であった。2)肝硬変(p<0.0001)、血小板数<11.7万/mm3(p<0.0001)、FIB-4>4.08(p<0.0001)、年齢>49歳(p=0.0021)、IV型コラーゲン>200 ng/mL(p=0.0046)、AFP>6.4 ng/mL(p=0.0094)で発癌率が有意に高かった。ウイルス因子では、治療開始時のHBsAg（≦3.53 log IU/mL、p＝0.047）、HBsAg糖鎖異性体に対する組換えモノクローナル抗体（HBsAgGi）/HBsAg比（≧1.10、p＝0.035）、HBV DNA（≦6.3 log copies/mL、p＝0.012）、HBsAg（≦3. 19 log IU/mL；p＝0.033）が肝発癌と有意に関連していた。3) sICOS>164.71 pg/mL(p=0.014)、sPD-1<447.27 pg/mL(p=0.031)、sCD40<493.68 pg/mL(p=0.032)、sHVEM<2470.83 pg/mL(p=0.038)で発癌率が有意に高かった。4)多変量解析では、sPD-1<447.27 pg/mL(HR 4.537、95%CI 1.363-15.103)、AFP>6.4 ng/mL(HR 5.524、95%CI 1.084-28.164)が肝発癌に寄与する独立因子であった。また、発癌例おいてsPD-1は核酸アナログ開始後6ヶ月(p=0.028)および1年(p=0.028)、発癌前1年(p=0.028)および6ヶ月(p=0.018)、発癌時(p=0.0077)には核酸アナログ開始時と比べ有意に低下したが、発癌前の再上昇は認めなかった。
結論としてHBV制御後肝発癌に関連する因子として、壊死・炎症に伴う肝細胞の再生など発癌ポテンシャルを反映するAFPなどに加え、がん免疫の疲弊を反映するsPD-1が抽出された。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

既存の臨床検体を用いて血漿中の可溶性免疫チェックポイント関連をmultiplex immunoassaysを用いて測定するなど、後方視的検討による解析を進めることにより上記の結果を得ることが出来た。得られた結果については学会ならびに論文報告することが出来た(Kozuka R, Enomoto M, et al. Sci Rep. 2022;12(1):105)。また新規マーカーHBsAgGiを含めたウイルス因子を追加することにより、治療中のHBsAgGiとHBsAgの組み合わせが核酸アナログ治療中の肝発癌を予測することを示した(Kozuka R, Enomoto M, et al. Hepatol Res. 2024 Feb 7. In press)。
一方、患者から採取した末梢血リンパ球をHBV蛋白で刺激し、3Hチミジンの取り込みによってT細胞の増殖能を、ELISPOTアッセイによってIFNγやIL-10の産生能を測定するなど、基礎的研究も予定していたがこれに関しては遅れている。

Strategy for Future Research Activity

R5年度までに得られたデータと臨床データとの比較、validationを行う。
1) 臨床データとの比較：上記より得られた末血中の免疫チェックポイント分子、T細胞増殖能、T細胞表面マーカーの経時的変化、肝組織内の遺伝子発現と臨床データを比較する。
① 抗HBV治療症例：奏功例と無効例の比較を行う。例えば治療中のHBVマーカー(HBs抗原、HBcr抗原、HBV DNA)の変化と可溶性チェックポイント分子の変化との関係を解析する。
② 肝病態進展症例：線維化ステージ（F1/F2/F3/F4）ごとの可溶性チェックポイント分子の比較、発癌例と非発癌例の可溶性チェックポイント分子の比較などを行う。
2) 外部コホートを用いたvalidation：OCU Liver Studyグループより症例を追加し、当院の患者コホートでの検討よりバイオマーカー候補にあがった分子の有用性について検証を行う。

Research Products

• [Int'l Joint Research] Stanford University Medical Center(米国)
• [Journal Article] Hepatitis B surface antigen glycan isomer is a predictor of the development of hepatocellular carcinoma during nucleoside/nucleotide analog therapy (2024)
  • Author(s): Kozuka R, Enomoto M, Yukawa-Muto Y, Odagiri N, Kotani K, Motoyama H, Kawamura E, Hagihara A, Fujii H, Uchida-Kobayashi S, Kawada N
  • Journal Title: Hepatology Research Volume: 00 Issue: 7 Pages: 00-00
  • DOI: 10.1111/hepr.14016
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Mortality in patients with chronic hepatitis B treated with tenofovir or entecavir: A multinational study (2024)
  • Author(s): Jang TY, Liang PC, Jun DW, Jung JH, Toyoda H, Wang CW, Yuen MF, Cheung KS, Yasuda S, Kim SE, Yoon EL, An J, Enomoto M, Kozuka R, Chuma M, Nozaki A, Ishikawa T, Watanabe T, Atsukawa M, Arai T, Hayama K, Ishigami M, Cho YK, Ogawa E, Kim HS, Shim JJ, Uojima H, Jeong SW, Ahn SB, Takaguchi K, Senoh T, et al
  • Journal Title: Journal of Gastroenterology and Hepatology Volume: 00 Issue: 6 Pages: 00-00
  • DOI: 10.1111/jgh.16537
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Global treatment rate and barriers to direct‐acting antiviral therapy: A systematic review and meta‐analysis of 146 studies and 1?760?352 hepatitis C virus patients (2023)
  • Author(s): Nguyen VH, Huang DQ, Le MH, Jin M, Lee EY, Henry L, Nerurkar SN, Ogawa E, Thin KN, Teng MLP, Goh KS, Kai JCY, Wong C, Tan DJH, Thuy LTT, Hai H, Enomoto M, Cheung R, Nguyen MH
  • Journal Title: Liver International Volume: 43 Issue: 6 Pages: 1195-1203
  • DOI: 10.1111/liv.15550
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Antiviral therapy substantially reduces HCC risk in patients with chronic hepatitis B infection in the indeterminate phase (2023)
  • Author(s): Huang DQ, Tran A, Yeh ML, Yasuda S, Tsai PC, Huang CF, Dai CY, Ogawa E, Ishigami M, Ito T, Kozuka R, Enomoto M, Suzuki T, Yoshimaru Y, Preda CM, Marin RI, Sandra I, Tran S, Quek SXZ, Khine HHTW, Itokawa N, Atsukawa M, Uojima H, Watanabe T, Takahashi H, Inoue K, Maeda M, Hoang JK, Trinh L, Barnett S, et al
  • Journal Title: Hepatology Volume: 78 Issue: 5 Pages: 1558-1568
  • DOI: 10.1097/hep.0000000000000459
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Increased spine bone density in patients with chronic hepatitis B switched to tenofovir alafenamide: A prospective, multinational study (2023)
  • Author(s): Ogawa E, Jun DW, Toyoda H, Hsu YC, Yoon EL, Ahn SB, Yeh ML, Do S, Trinh HN, Takahashi H, Enomoto M, Kawada N, Yasuda S, Tseng CH, Kawashima K, Lee HA, Inoue K, Haga H, Do AT, Maeda M, Hoang JH, Cheung R, Ueno Y, Eguchi Y, Furusyo N, Yu ML, Tanaka Y, Nguyen MH
  • Journal Title: Alimentary Pharmacology &amp; Therapeutics Volume: 59 Issue: 2 Pages: 239-248
  • DOI: 10.1111/apt.17785
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Effectiveness of entecavir vs tenofovir disoproxil fumarate for functional cure of chronic hepatitis B in an international cohort (2022)
  • Author(s): Hsu YC, Jun DW, Peng CY, Yeh ML, Trinh H, Wong GL, Kim SE, Chen CH, Oh H, Lin CH, Trinh L, Wong VW, Yoon E, Ahn SB, Huang D, Cho YK, Jeong JY, Jeong SW, Kim HS, Xie Q, Liu L, Riveiro-Barciela M, Tsai PC, Accarino EV, Toyoda H, Enomoto M, … Nguyen MH.
  • Journal Title: Hepatology International Volume: 16 Issue: 6 Pages: 1297-1307
  • DOI: 10.1007/s12072-022-10411-x
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Progression Rates by Age, Sex, Treatment, and Disease Activity by AASLD and EASL Criteria: Data for Precision Medicine (2022)
  • Author(s): Park J, Le AK, Tseng TC, Yeh ML, Jun DW, Trinh H, Wong GLH, Chen CH, Peng CY, Kim SE, Oh H, Kwak MS, Cheung KS, Toyoda H, Hsu YC, Jeong JY, Yoon EL, Ungtrakul T, Zhang J, Xie Q, Ahn SB, Enomoto M, … Nguyen MH.
  • Journal Title: Clinical Gastroenterology and Hepatology Volume: 20 Issue: 4 Pages: 874-885.e4
  • DOI: 10.1016/j.cgh.2021.05.062
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Soluble programmed cell death-1 predicts hepatocellular carcinoma development during nucleoside analogue treatment. (2022)
  • Author(s): Ritsuzo Kozuka, Masaru Enomoto, Minh Phuong Dong, Hoang Hai, Le Thi Thanh Thuy, Naoshi Odagiri, Kanako Yoshida, Kohei Kotani, Hiroyuki Motoyama, Etsushi Kawamura, Atsushi Hagihara, Hideki Fujii, Sawako Uchida-Kobayashi, Akihiro Tamori, Norifumi Kawada
  • Journal Title: Scientific reports Volume: 12 Issue: 1 Pages: 105-105
  • DOI: 10.1038/s41598-021-03706-w
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Outcome of nucleos(t)ide analog intervention in patients with preventive or on‐demand therapy for hepatitis B virus reactivation (2021)
  • Author(s): Tamori Akihiro、Kimura Kiminori、Kioka Kiyohide、Enomoto Hirayuki、Odagiri Naoshi、Kozuka Ritsuzo、Uchida‐Kobayashi Sawako、Enomoto Masaru、Kawada Norifumi、Mizokami Masashi
  • Journal Title: Journal of Medical Virology Volume: 93 Issue: 6 Pages: 3679-3687
  • DOI: 10.1002/jmv.26526
  • NAID: 120007169287
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] I shall be released (from infinite HBV nucleos(t)ide analog therapy): Japanese experience (2021)
  • Author(s): Enomoto Masaru、Umemura Takeji、Suzuki Fumitaka
  • Journal Title: Journal of Hepatology Volume: 75 Issue: 6 Pages: 1496-1497
  • DOI: 10.1016/j.jhep.2021.07.002
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Incidences and Determinants of Functional Cure During Entecavir or Tenofovir Disoproxil Fumarate for Chronic Hepatitis B (2021)
  • Author(s): Hsu Yao-Chun、Yeh Ming-Lun、Wong Grace Lai-Hung、Chen Chien-Hung、Peng Cheng-Yuan、Buti Maria、Enomoto Masaru、Xie Qing、Trinh Huy、Preda Carmen、Liu Li、Cheung Ka-Shing、Yeo Yee Hui、Hoang Joseph、Huang Chung-Feng、Riveiro-Barciela Mar、Kozuka Ritsuzo、Istratescu Doina、Tsai Pei-Chien、Accarino Elena Vargas、et al.
  • Journal Title: The Journal of Infectious Diseases Volume: 224 Issue: 11 Pages: 1890-1899
  • DOI: 10.1093/infdis/jiab241
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
• [Journal Article] On‐treatment gamma‐glutamyl transferase predicts the development of hepatocellular carcinoma in chronic hepatitis B patients (2021)
  • Author(s): Huang Chung‐Feng、Jang Tyng‐Yuan、Jun Dae Won、Ahn Sang Bong、An Jihyun、Enomoto Masaru、Takahashi Hirokazu、Ogawa Eiichi、Yoon Eileen、Jeong Soung Won、Shim Jae‐Jun、Jeong Jae Yoon、Kim Sung Eun、Oh Hyunwoo、Kim Hyoung Su、Cho Yong Kyun、Kozuka Ritsuzo、Inoue Kaori、Cheung Ka Shing、Mak Lung Yi、et al.
  • Journal Title: Liver International Volume: 42 Issue: 1 Pages: 59-68
  • DOI: 10.1111/liv.15085
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
• [Presentation] Soluble PD-1 and BTLA proteins as biomarkers for predicting the anti-HBV treatment responsiveness (2024)
  • Author(s): Hai H, Enomoto M, Thuy LTT, Odagiri N, Kotani K, Motoyama H, Kozuka R, Hagihara A, Kawamura E, Fujii H, Uchida-Kobayashi S, Kawada N
  • Organizer: The 33rd Annual Meeting of the Asian Pacific Association for the Study of the Liver (APASL 2024 Kyoto)
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] 核酸アナログ開始後の肝発癌リスク因子 新規糖鎖マーカーHBsAgGiを含め (2023)
  • Author(s): 小塚 立蔵, 榎本 大, 河田 則文
  • Organizer: 第59回 日本肝臓学会総会
• [Presentation] Soluble programmed cell death-1 as a predictor of hepatocellular carcinoma development during nucleoside analogue treatment (2023)
  • Author(s): Kozuka R, Enomoto M, Dong MP, Hai H, Thuy LTT, Odagiri N, Yoshida K, Kotani K, Motoyama H, Kawamura E, Hagihara A, Fujii H, Uchida-Kobayashi S, Tamori A, Kawada N
  • Organizer: 13th Asia-Pacific Primary Liver Cancer Expert Meeting (APPLE 2023)
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Global differences in the evaluation and treatment of patients with chronic hepatitis B: a real-B study (2023)
  • Author(s): Kudaravalli S, Huang DQ, Kam LY, Nguyen VH, Trinh HN, Hsu YC, Li J, Zhang JQ, Ogawa E, Lee DH, Ito T, Watanabe T, Enomoto M, Preda CM, TanakaY, Yuen MF, Atsukawa M, Marciano S, Buti M, Do S, Wong C, Uojima H, Takahashi H, Quek S XZ, Khine HHTW, Ishigami M, Itokawa N, Go MS, Marin RI, Sandra I, Suzuki T, et al
  • Organizer: 74th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases (AASLD)
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Serum levels of circulating soluble b- and t- lymphocyte attenuator in unresectable hepatocellular carcinoma as a predictor of response to atezolizumab and bevacizumab (2023)
  • Author(s): Odagiri N, Hai H, Thuy LTT, Yukawa-Muto Y, Kotani K, Motoyama H, Kozuka R, Kawamura E, Hagihara A, Fujii H, Uchida-Kobayashi S, Enomoto M, Kawada N
  • Organizer: 74th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases (AASLD)
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Long-term outcome of peginterferon-α2a treatment in patients with chronic hepatitis B: a single-center, real-world study in Japan (2022)
  • Author(s): Masaru Enomoto, Ritsuzo Kozuka, Naoshi Odagiri, Kohei Kotani, Hiroyuki Motoyama, Etsushi Kawamura, Atsushi Hagihara, Hideki Fujii, Sawako Uchida-Kobayashi, Akihiro Tamori, Norifumi Kawada
  • Organizer: 31st Conference of the Asian Pacific Association for the Study of the Liver (APASL 2022)
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] PegIFN治療後の長期経過におけるHBs抗原陰性化例の特徴 (2022)
  • Author(s): 小塚 立蔵, 榎本 大, 河田 則文
  • Organizer: 第108回 日本消化器病学会総会
• [Presentation] B型慢性肝炎の病態に基づいた両立支援の重要性 (2022)
  • Author(s): 榎本 大, 小塚 立蔵, 河田 則文
  • Organizer: 第108回 日本消化器病学会総会
• [Presentation] 核酸アナログ開始後のHBs抗原量の低下を予測する因子の検討 宿主遺伝子多型も含めて (2022)
  • Author(s): 小塚 立蔵, 榎本 大, 河田 則文
  • Organizer: 第58回 日本肝臓学会総会
• [Presentation] Antiviral therapy reduces hepatocellular carcinoma risk among HBV patients in the indeterminate phase (2022)
  • Author(s): Huang D, Tran AK, Yeh ML, Tsai PC, Chuang WL, Huang CH, Dai CY, Toyoda H, Yasuda S, Trinh H, Ogawa E, Ishigami M, Ito T, Kozuka R, Enomoto M, … Nguyen MH
  • Organizer: 73rd Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases (AASLD)
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Increased treatment response and bone density in patients with chronic hepatitis B switched to tenofovir alafenamide from other nucleos(t)ide analogue: 96-week results from a prospective multinational study (2022)
  • Author(s): Ogawa E, Jun DW, Toyoda H, Hsu YC, Yoon E, Ahn SB, Do ST, Trinh HN, Takahashi H, Enomoto M, … Nguyen MH
  • Organizer: 73rd Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases (AASLD)
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] PegIFN治療後の長期経過におけるHBsAg陰性化予測因子の検討 (2022)
  • Author(s): 小塚 立蔵, 榎本 大, 河田 則文
  • Organizer: 第26回 日本肝臓学会大会
• [Presentation] 核酸アナログ多剤耐性例のウイルス学的特徴 (2022)
  • Author(s): 林 佐奈衣, 榎本 大, 松浦 健太郎, 井出 達也, 松居 剛志, 髭 修平, 榎本 平之, 渡邊 丈久, 長岡 克弥, 立山 雅邦, 田中 靖人
  • Organizer: 第26回 日本肝臓学会大会
• [Presentation] B型肝炎の治療戦略の現状-次世代までに今，出来ること- (2022)
  • Author(s): 榎本 大
  • Organizer: 第64回日本消化器病学会大会サテライトシンポジウム96
  • Invited
• [Presentation] B型慢性肝炎に対するfunctional cureに向けたPegIFNの長期成績 両立支援の重要性を含め (2021)
  • Author(s): 小塚 立蔵, 榎本 大, 武藤 芳美, 小田桐 直志, 小谷 晃平, 元山 宏行, 川村 悦史, 萩原 淳司, 藤井 英樹, 打田 佐和子, 田守 昭博, 河田 則文
  • Organizer: 肝臓 (0451-4203)62巻Suppl.3 Page A708(2021.11)
• [Presentation] 肝癌のハイリスク患者地域、職域、院内での拾い上げ 肝炎ウイルス感染者の院内紹介促進のための効率的な個別勧奨の試み (2021)
  • Author(s): 榎本 大, 西口 修平, 河田 則文
  • Organizer: 日本消化器病学会雑誌 (0446-6586)118巻臨増総会 Page A212
• [Presentation] HBV再活性化対策のために投与された核酸アナログの中止基準の検討 (2021)
  • Author(s): 田守 昭博, 木村 公則, 木岡 清英, 榎本 平之, 小田桐 直志, 小塚 立蔵, 打田 佐和子, 榎本 大, 河田 則文, 溝上 雅史
  • Organizer: 肝臓 (0451-4203)62巻Suppl.1 Page A397
• [Presentation] Levels of soluble immune checkpoint proteins following antiviral treatment in chronic hepatitis c patients and the roles of sCD27 in hepatocellular carcinoma development (2021)
  • Author(s): Dong, MP; Thuy, LTT; Hai, H; Hieu, VN; Hoang, DV; Uchida-Kobayashi, S; Enomoto, M; Tamori, A; Kawada, N
  • Organizer: 72nd Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases (AASLD)
  • Int'l Joint Research