Project/Area Number |
21K08201
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Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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Allocation Type | Multi-year Fund |
Section | 一般 |
Review Section |
Basic Section 53030:Respiratory medicine-related
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Research Institution | Kanazawa University |
Principal Investigator |
北 賢二 金沢大学, がん進展制御研究所, 特任助手 (80625252)
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Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
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Keywords | 肺がん / オルガノイド / 薬物耐性 / オシメルチニブ |
Outline of Research at the Start |
ヒトがん細胞株を用いた研究においては、患者腫瘍組織の微小環境や不均一性により、実臨床とは薬剤感受性の乖離がしばしば問題となる。また、より実臨床に近いPDX(Patient Derived Xenograft)モデルは、患者背景をよく反映しているが、維持していくには時間、労力、資金が必要となる。また、マウスを大量に消費するという倫理的な問題もある。そこで、本研究では、より患者背景を反映し、倫理的な問題も解決できる肺がんオルガノイドモデルの系の確立、及びオシメルチニブ耐性メカニズムの解明を目的としている。
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Outline of Annual Research Achievements |
今年度はすでに樹立できたオルガノイドを用い、培養液中にオシメルチニブを添加することでオシメルチニブ耐性オルガノイド樹立を試みた。EGFR変異オルガノイドはオシメルチニブに対する感受性が著しく高く、また増殖が遅いため、耐性化するのに手間取っている。 また、EGFR変異(exon 19 deletion + T790M)オルガノイドに発光遺伝子ルシフェラーゼ及び、蛍光遺伝子EGFPの(ELuc-EGFP)導入を試みた。遺伝子導入方法はエレクトロポレーション法を用いた。ELuc-EGFP遺伝子導入したオルガノイドをpuromycinでセレクションし、ELuc-EGFP遺伝子が組み込まれたオルガノイドを選別した。蛍光顕微鏡により蛍光を確認することで、ELuc-EGFP遺伝子を導入した肺がんオルガノイドが樹立できたことを確認した。さらにこのELuc-EGFP肺がんオルガノイドにオシメルチニブを添加し、オシメルチニブ耐性を維持していることも確認した。ELuc-EGFP遺伝子を導入したオルガノイド及び、遺伝子導入していないオルガノイドを、SHOマウス(重度複合免疫不全ヘアレスマウス)及びNOGマウス(超免疫不全マウス)皮下に移植し、生着するかどうか確認した。遺伝子導入していないオルガノイドは、前年度SHOマウス皮下に移植したが、今年度はさらに細胞数を増やし移植を試みたが、どちらも現段階で皮下に生着していない。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
樹立した肺がんオルガノイドはオシメルチニブの感受性が高く、オシメルチニブ耐性オルガノイドの作製に苦労している。また、肺がんオルガノイドがマウス皮下に生着しなかったため、進捗がやや遅れている。
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Strategy for Future Research Activity |
引き続きオシメルチニブ耐性オルガノイドの樹立を試みる。樹立できたオシメルチニブ耐性オルガノイドを薬剤スクリーニングし、標的分子となり得る分子を特定する。また、オシメルチニブ耐性オルガノイドのDNA、RNAを採取し、エクソームシークエンス、RNAシークエンスを行い、薬剤標的分子を探索する。
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