レチノイン酸によるマクロファージ・パイロトーシス制御機構

Research Project

Project/Area Number	21K08433
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Allocation Type	Multi-year Fund
Section	一般
Review Section	Basic Section 54020:Connective tissue disease and allergy-related
Research Institution	Hirosaki University
Principal Investigator	平賀寛人弘前大学, 医学研究科, 准教授 (80637546)
Project Period (FY)	2021-04-01 – 2025-03-31
Project Status	Granted (Fiscal Year 2023)
Budget Amount *help	¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000) Fiscal Year 2023: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000) Fiscal Year 2022: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000) Fiscal Year 2021: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
Keywords	レチノイン酸 / ビタミンA / マクロファージ / パイロトーシス / インフラマソーム
Outline of Research at the Start	「レチノイン酸がマクロファージのパイロトーシスに及ぼす影響と自己炎症性疾患の病因・病態への関与について明らかにする」のが本研究の目的である。本検討によって、レチノイン酸が自然免疫系におけるパイロトーシスに及ぼす影響を明らかにすることで、自己炎症性疾患に対する寛解導入・維持療法への応用や診断・治療効果判定の新規バイオマーカーとなる可能性があるという点で非常に独自性・創造性があると考えている。
Outline of Annual Research Achievements	VADマウスでは腸炎モデル・感染モデルのいずれにおいても宿主抵抗性が減弱しており、ビタミンAがマクロファージのパイロトーシスに及ぼす影響と炎症性腸疾患の病因・病態に関与している可能性に着目し、本研究を進めている。当該年度に実施した研究の成果は下記の通りである。 ①VADマウスの作製：妊娠雌をビタミンA欠乏食（オリエンタルイースト社）で飼育、10週齢まで欠乏食を継続。対照群は通常餌で飼育したVitamin A-sufficient (VAS)マウスを使用。 ②DSS腸炎誘発：VAS・VADマウスに4% DSS（M.W. 5000, WAKO）自由飲水で腸炎を誘発。0・1・2日後にコラゲナーゼ法でLPMCを分離、LPS添加して培養、パイロトーシスを評価。 ③Salmonella typhimurium経口感染：S.typhimurium Χ3306株を1X108 CFU/0.2 mlに調整し、経口感染させる。感染0・1・2日後に脾臓を採取、パイロトーシス関連分子を解析。 ④CD11b+脾細胞分離・培養：VAS・VADマウスから脾臓を摘出、コラゲナーゼ処理・破砕・溶血をへて脾細胞を分離する。CD11b+脾細胞をマグネットビーズで標識し、AUTOMACS（Miltenyi Biotec社）で分離する。10% FBS RPMIで5X106 /mlに細胞浮遊液を調整し、対照群・LPS添加群（10 μg/ml）に分けて培養→パイロトーシスを解析（上清中IL-1β測定, LDH-releasing assay）。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 自己炎症性疾患患者の血清・内視鏡サンプリングが当初の予定よりは進展が遅れているが、その他計画通りである。
Strategy for Future Research Activity	本研究開始時の仮説である、“マクロファージにおけるレチノイン酸受容体シグナルは、オートファジーを介したCaspase-11活性化の調節により、パイロトーシスとIL-1β産生を制御している”は証明されつつある。追加実験で確定、論文化を進める予定である。

Report

(3 results)