幹細胞表面特異的糖鎖を標的とした膵癌の新規治療法の開発
Project/Area Number |
21K08764
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Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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Allocation Type | Multi-year Fund |
Section | 一般 |
Review Section |
Basic Section 55020:Digestive surgery-related
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Research Institution | Tokyo Metropolitan Geriatric Hospital and Institute of Gerontology |
Principal Investigator |
五味 不二也 地方独立行政法人東京都健康長寿医療センター(東京都健康長寿医療センター研究所), 東京都健康長寿医療センター研究所, 研究員 (40205620)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
進士 誠一 日本医科大学, 医学部, 講師 (80409193)
佐々木 紀彦 地方独立行政法人東京都健康長寿医療センター(東京都健康長寿医療センター研究所), 東京都健康長寿医療センター研究所, 研究員 (80639063)
石渡 俊行 地方独立行政法人東京都健康長寿医療センター(東京都健康長寿医療センター研究所), 東京都健康長寿医療センター研究所, 研究部長 (90203041)
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Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2025-03-31
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Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2024: ¥780,000 (Direct Cost: ¥600,000、Indirect Cost: ¥180,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2021: ¥780,000 (Direct Cost: ¥600,000、Indirect Cost: ¥180,000)
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Keywords | 膵癌細胞 / nestin / 表面糖鎖 / 発現細胞 / geneticin / 多様性 / 癌幹細胞 |
Outline of Research at the Start |
近年、癌細胞の多様性が注目され、特に少数の「癌幹細胞」が、癌の再発、転移に重要であると考えられている。膵癌の癌幹細胞マーカーの中でnestinは、膵癌の極めて有望な早期診断および治療標的と考えられているが、nestinは細胞内骨格タンパクであるため、これを標的とした診断法・治療法の開発は容易ではない。 本研究では、nestin陽性の膵癌の癌幹細胞を生存した状態で分離し、癌幹細胞表面に特異的な糖鎖マーカーを同定する。これにより、癌幹細胞特異的糖鎖による膵癌の早期診断法と、癌幹細胞に対する分子標的治療法の開発を目指す。
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Outline of Annual Research Achievements |
凍結保存していた、nestinを強制発現させたMIAPaCa-2とPK-8細胞を解凍した後、1~2継代し、RT-PCR法によりnestinの発現を再確認した。MIAPaCa-2およびPK-8のnestin強制発現細胞はmock細胞に対して、nestin mRNAがともに約2.5倍程度高かった。これらの細胞を用いて細胞表面の糖鎖解析を行なった。凍結サンプルから疎水性画分を抽出して膜成分とし、レクチンマイクロアレイを行ない、Glycostation Readerにより解析した。 Nestin強制発現により、MIAPaCa-2細胞ではDSAに反応する(GLcNAcbeta1-4)nが減少し、分枝構造が減っていると考えられた。PK-8細胞ではHHLに反応する高マンノース鎖が減少していた。Nestin強制発現によって2種類の細胞に共通する糖鎖構造の変化は見られなかった。理由としては細胞質に発現するnestinが細胞表面の糖鎖の変化を引き起こし難いことや、強制発現したnestinの発現量が少ないことが考えられた。一方で、細胞間では表面糖鎖の特徴は大きく異なっており、それぞれの細胞の特徴を示していることが考えられた。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
予定通りに、nestin強制発現した膵癌細胞膜成分をレクチンマイクロアレイにかけ、Glycostation Readerにより解析を行なうことができた。
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Strategy for Future Research Activity |
十分にnestinの発現が高い同じ凍結細胞からsphereを作成し、nestinや他の膵癌幹細胞のマーカーと思われる分子に対する抗体で染色、nestin過剰発現により幹細胞が増えるかどうかの確認を行う。十分に幹細胞が増えているとするならば、sphereを材料に糖鎖解析へ進む。 もしくは、nestin過剰発現により糖転移酵素の発現に変化がないかを検討する。
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Report
(2 results)
Research Products
(5 results)
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[Journal Article] Multiple cystic sphere formation from PK-8 cells in three-dimensional culture2022
Author(s)
Yuuki Shichi, Fujiya Gomi, Yoshibumi Ueda, Keisuke Nonaka, Fumio Hasegawa, Yasuko Hasegawa, Nae Hinata, Hisashi Yoshimura, Masami Yamamoto, Kimimasa Takahashi, Tomio Arai, Toshiyuki Ishiwata
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Journal Title
Biochemistry and Biophysics Reports
Volume: 32
Pages: 101339-101339
DOI
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Peer Reviewed / Open Access
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