| Project/Area Number |
21K09507
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 56040:Obstetrics and gynecology-related
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| Research Institution | Osama Woman's and Children's Hospital |
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Principal Investigator |
川口 晴菜 地方独立行政法人大阪府立病院機構大阪母子医療センター(研究所), その他部局等, 産科・副部長 (00752867)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
柳原 格 地方独立行政法人大阪府立病院機構大阪母子医療センター(研究所), 免疫部門, 部長 (60314415)
西海 史子 地方独立行政法人大阪府立病院機構大阪母子医療センター(研究所), 免疫部門, 流動研究員 (60599596)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2025-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000)
Fiscal Year 2023: ¥910,000 (Direct Cost: ¥700,000、Indirect Cost: ¥210,000)
Fiscal Year 2022: ¥780,000 (Direct Cost: ¥600,000、Indirect Cost: ¥180,000)
Fiscal Year 2021: ¥2,600,000 (Direct Cost: ¥2,000,000、Indirect Cost: ¥600,000)
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| Keywords | 子宮平滑筋収縮 / カルシウム濃度 / ウレアプラズマ感染 / カルシウムブロッカー / ウレアプラズマ / 子宮収縮 / 早産 |
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| Outline of Research at the Start |
早産の原因となるUreaplasmaが、炎症性サイトカインを介した反応ではなく、直接的に子宮平滑筋細胞の収縮を起こすかを検証することを目的とする。子宮平滑筋の収縮を観察する方法として、3つの方法を予定する。一つ目は、Ureaplasmaにより細胞内カルシウム濃度の変化を観察するものである。二つ目は、Ⅰ型コラーゲン繊維を使用した三次元培養系を用い細胞収縮の有無を確認する。三つ目は、妊娠マウスを用い、腟から子宮内腔に挿入した圧センサーを使用し、UreaplasmaやUreaplasmaの表面に存在する主要なリポ蛋白質をジアチル化したリポペプチド(UPM-1)による子宮筋収縮を計測する。
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的は、Ureaplasma感染によって子宮平滑筋細胞が収縮する機序について解明することである。子宮平滑筋肉腫細胞(SKN細胞)にUreaplasma parvumを感染させFRETシステムでカルシウムのオシレーションを測定したところ、投与後数秒からカルシウム濃度が上昇することを確認した。Ureaplasma の外膜リポタンパクMBAに対する抗体を結合させたUreaplasma parvum では細胞内カルシウム濃度の上昇を認めなくなった。さらにカルシウムキレート剤であるBAPTA-AM、EGTAにて処理したのちに、SKN細胞にUreaplasma を感染させ、免疫染色したところ、Ureaplasmaの侵入が減少した。以上のことから、Ureaplasmaの細胞内侵入には、カルシウムチャンネルが関与している可能性、UreaplasmaのMBAが細胞内のカルシウム濃度の上昇に関与している可能性が示唆された。
妊娠マウスの腟から子宮内に圧センサー(Millar Mikro-Tipシングル圧力カテーテル)を挿入し、合成したMBAのN末端22アミノ酸残基をジアチル化したリポペプチド(UPM-1)を腹腔内投与したところ、投与後早期から数時間にわたって子宮収縮を認め、多くは翌日には胎児死亡や流産に至ることが確認できた。切迫早産治療で臨床上広く使用されているカルシウム拮抗薬投与後のマウスでは、子宮収縮は有意に減少するが、胎児死亡や流産は防ぐことはできなかった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究期間内に産休があったが、復職後の研究進捗状況は概ね計画通りである。
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| Strategy for Future Research Activity |
カルシウムキレート剤であるBAPTA-AM、EGTAにて処理したのち、UreaplasmaをSKN細胞に感染させ、MBAの活性に変化があるかについてウエスタンブロット法で検証を重ねる。また、カルシウム拮抗薬によって、Ureaplasmaの細胞内侵入が変化するかについて免疫染色にて確認する。子宮収縮に関与するノックアウトマウスおよびマウスから抽出したノックアウト細胞の樹立に成功しているため、それらを用いてカルシウムチャンネルを介したUreaplasmaの細胞内侵入による細胞内のシグナル伝達について解析を進める。
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