Cellular biological analysis and developmental research of thrapeutic agents on adenoviral ocular infection
| Project/Area Number |
21K09709
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 56060:Ophthalmology-related
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| Research Institution | Fukuoka University |
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Principal Investigator |
内尾 英一 福岡大学, 医学部, 教授 (70232840)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥3,900,000 (Direct Cost: ¥3,000,000、Indirect Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
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| Keywords | アデノウイルス / 結膜炎 / 感染症 / レセプター / 初期転写因子 / 系統解析 / ウイルス性結膜炎 / 抗ウイルス薬 / ゲノム解析 / 増殖速度 |
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| Outline of Research at the Start |
アデノウイルスは，流行性角結膜炎及び咽頭結膜熱などのウイルス性結膜炎を生じるが，眼科領域以外にも呼吸器系の上気道炎を生じ，重症肺炎の原因ともなり，死亡例もあるため臨床的に重要である。わが国では感染症サーベイランスによって，アデノウイルス結膜炎患者数が毎年100万人前後にのぼる。多数の感染症例を毎年全国で生じることから，臨床的及び公衆衛生学的にも，対策が必要であるが，現在までアデノウイルスに対する特異的抗ウイルス治療薬は十分に確立されていない。そこで，本研究ではウイルス薬の抗アデノウイルス作用の解析，新型アデノウイルスの増殖性の特徴の解析とアデノウイルス実験系の細胞生物学的解析を行う計画である。
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| Outline of Annual Research Achievements |
①3D組織モデルを用いたアデノウイルス実験系における組織親和性のアデノウイルス型間の差異の検討と治療薬の有効性の検討
これまで，アデノウイルス感染の実験モデルの単層培養系（2D）に対して，縦方向の厚みを持たせて細胞を培養する手法を3次元培養(3Dculture)が実用化され，角膜細胞モデルが確立されてきた。この角膜3Dモデル（LabCyte CORNEA-MODEL，オリエンタル酵母）の細胞傷害効果と病態を経時的に観察し，型間の相違も含めて解析を行った。その結果，アデノウイルス5型，37型および新型の54型で，接種後の経過を比較したところ，明らかな差がないことがわかった。今回の実験からも，その増殖速度が書記に遅く，病変の進行が緩やかに長く続くことが示唆された。
②新型アデノウイルスの角結膜病変の特異性の機序に関する細胞生物学的検討
アデノウイルスの実験系によく使用されるA549細胞だが，これはヒト肺胞基底上皮腺癌細胞に由来し，重層扁平上皮であり，重層円柱上皮である結膜上皮とは異なっている。またインターフェロン産生ノックアウトの性質があることも，新型D種型の特徴を正確に現しているか疑問があった。そこで，A549細胞に対して，CK18やCK19のような上皮細胞特異的マーカーを維持し，インターフェロン産生能を保持しているヒト不死化結膜上皮細胞（BBP10870IM）を比較対照として，複数のアデノウイルス型(Ad5, Ad8, Ad54, Ad56, Ad64)間のウイルス増殖性を検討した。その結果，ウイルス接種後，複数の時間ポイントでペレットと上清に分けてウイルスを回収しコピー数を測定し，増殖速度の計算を行い，感染価の測定を組織培養感染量(TCID50/ml)を各々の型で測定して群間比較する解析したが，A549細胞が他の培養細胞よりもどのウイルス型に対しても優れていることが示された。
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Report
(3 results)
Research Products
(49 results)
