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環境DNAを用いた魚類多種同時遺伝的多型分析法の開発と淡水魚類メタ群集研究の実践

Research Project

Project/Area Number 21K12329
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

Allocation TypeMulti-year Fund
Section一般
Review Section Basic Section 64040:Social-ecological systems-related
Research InstitutionOtsuma Women's University

Principal Investigator

小関 右介  大妻女子大学, 家政学部, 准教授 (00513772)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 武島 弘彦  福井県立大学, 海洋生物資源学部, 客員研究員 (50573086)
山中 裕樹  龍谷大学, 先端理工学部, 准教授 (60455227)
Project Period (FY) 2021-04-01 – 2025-03-31
Project Status Granted (Fiscal Year 2023)
Budget Amount *help
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2024: ¥780,000 (Direct Cost: ¥600,000、Indirect Cost: ¥180,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2022: ¥910,000 (Direct Cost: ¥700,000、Indirect Cost: ¥210,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Keywords遺伝的多様性 / 環境DNA / メタバーコーディング / メタ群集 / 遺伝的多型
Outline of Research at the Start

本研究は、環境水中に存在する魚類DNAの塩基配列を多種同時並列的に決定するメタバーコーディング法を基盤として、魚類群集の遺伝的多様性を網羅的に評価する手法を開発する。また、開発した手法を用いて淡水魚類メタ群集の構成種とその遺伝的多型の空間分布を同時に評価し、メタ群集の空間構造とその決定プロセスを解明することで、広域的に分布・分散する大型生物のメタ群集動態を理解するとともに、地域の生物多様性保全に資する科学的知見を提供する。

Outline of Annual Research Achievements

本研究は、環境DNAメタバーコーディングデータから多種の遺伝的多型を同時に精度高く検出する多種同時遺伝的多型検出法を開発することを目的としている。
昨年度までに、メタバーコーディング解析により得られるアンプリコン配列データに混入するエラー配列(偽ハプロタイプ)を効果的に取り除く新たな手法(gmmDenoise法)の開発、その公共データを用いた性能評価およびRプログラムへの実装がほぼ完了したことから、本年度は本手法を用いた淡水魚類群集構成種の環境DNAベース集団遺伝構造解析の実践に着手した。
具体的には、佐渡島を流れる40以上の河川において採取した環境DNAサンプルについて、魚類ユニバーサルPCRプライマーセット(MiFish)を用いたメタバーコーディング解析(DNA抽出、PCR増幅、およびIllumina Miseqを用いたアンプリコンシーケンス解析)を実施した。また、得られたアンプリコン配列データの前処理(プライマー配列除去、フォワード配列とリバース配列の連結、低品質配列の除去、既存デノイズ法の適用、キメラ配列の除去など)から、分類学的名称の付与、およびgmmDenoise法によるエラー配列除去に至る一連の過程の解析パイプラインを構築した。この解析パイプラインを使用して、アユ、イワナ、カジカ、ドジョウなど10種以上の淡水魚について各サンプリング河川におけるアンプリコン配列変異(ASV: amplicon sequence variant)データを取得した。次年度はこの多地点ASVデータを用いて複数魚種の集団遺伝構造の解析を進める。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

補助事業期間の前半で手法開発を行い、後半で開発した手法を用いた研究の実践を行うという全体計画に沿ったスケジュールで進捗している。

Strategy for Future Research Activity

次年度も全体計画に沿ったかたちで研究を進める。

Report

(3 results)
  • 2023 Research-status Report
  • 2022 Research-status Report
  • 2021 Research-status Report
  • Research Products

    (6 results)

All 2024 2023 2022 2021 Other

All Journal Article (2 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Open Access: 2 results,  Peer Reviewed: 1 results) Presentation (3 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Small giants: tributaries rescue spatially structured populations from extirpation in a highly fragmented stream2022

    • Author(s)
      Tsuboi Jun‐ichi、Morita Kentaro、Koseki Yusuke、Endo Shinsuke、Sahashi Genki、Kishi Daisuke、Kikko Takeshi、Ishizaki Daisuke、Nunokawa Masanori、Kanno Yoichiro
    • Journal Title

      Journal of Applied Ecology

      Volume: - Issue: 8 Pages: 1997-2009

    • DOI

      10.1111/1365-2664.14200

    • Related Report
      2021 Research-status Report
    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] The freshwater fish fauna of Sado Island: a review of changes over 60 years, with an updated species list2021

    • Author(s)
      小関右介
    • Journal Title

      International Journal of Human Culture Studies

      Volume: 2021 Issue: 31 Pages: 62-67

    • DOI

      10.9748/hcs.2021.62

    • NAID

      130008089280

    • ISSN
      2187-1930
    • Year and Date
      2021-01-01
    • Related Report
      2021 Research-status Report
    • Open Access
  • [Presentation] A new amplicon error filtering method for environmental DNA-based population genetic research2024

    • Author(s)
      Koseki Y, Takeshima H, Yoneda R, Katayanagi R, Ito G, Yamanaka H
    • Organizer
      第71回日本生態学会
    • Related Report
      2023 Research-status Report
  • [Presentation] 環境DNAに基づくハプロタイプ分析のための新たなアンプリコンフィルタリング手法2023

    • Author(s)
      小関 右介, 武島 弘彦, 米田 龍仁, 片柳 海斗, 伊藤 玄, 山中 裕樹
    • Organizer
      第6回環境DNA学会
    • Related Report
      2023 Research-status Report
  • [Presentation] "Multiplex approach to ameliorate primer bias in MiFish eDNA metabarcoding: a case study of Ayu, Plecoglossus altivelis"2023

    • Author(s)
      Daisuke Isobe, Yusuke Koseki, Hirohiko Takeshima, Hiroki Yamanaka
    • Organizer
      The eDNA Society International Meeting 2023
    • Related Report
      2022 Research-status Report
    • Int'l Joint Research
  • [Remarks] YSKoseki/gmmDenoise

    • URL

      https://github.com/YSKoseki/gmmDenoise

    • Related Report
      2023 Research-status Report

URL: 

Published: 2021-04-28   Modified: 2024-12-25  

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