フィブリノゲン蓄積病モデル細胞を用いたフィブリノゲン機能解析と蓄積動態の解明
| Project/Area Number |
21K15945
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Review Section |
Basic Section 53010:Gastroenterology-related
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| Research Institution | Shinshu University |
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Principal Investigator |
新井 慎平 信州大学, 学術研究院保健学系, 助教 (70866053)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥3,640,000 (Direct Cost: ¥2,800,000、Indirect Cost: ¥840,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
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| Keywords | フィブリノゲン / フィブリノゲン蓄積病 / ケミカルシャペロン / 小胞体ストレス / フィブリン重合反応 / 免疫沈降 / 大量培養 / ローラーボトル / セルスタック / 先天性フィブリノゲン異常症 / フォールディング異常 |
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| Outline of Research at the Start |
近年、一部の先天性フィブリノゲン（Fbg）異常症において、産生された異常Fbgが細胞外に分泌されずに肝細胞の小胞体に蓄積し、肝細胞障害・肝硬変を引き起こすFbg蓄積病(Fbg Storage Disease；FSD)の存在が明らかとなってきた。本研究では、FSDモデル細胞を用いて、細胞外に分泌されるFbgと小胞体内に蓄積するFbgの違いを明らかにするとともに、FSD発症のメカニズムの解明に取り組む。さらに、小胞体蓄積を抑制・改善する物質の候補を探索し、それらの効果を検証して将来の治療薬の開発に繋げることを目的としている。
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| Outline of Annual Research Achievements |
我々の研究室ではFSD型遺伝子変異を有する異常Fbg安定発現細胞株を樹立し、それらをFSDのモデル細胞として用いて病態解明に取り組んでいる。2023年度は、ケミカルシャペロンの効果で小胞体における異常Fbgの蓄積を軽減できるかどうか研究を行った。小胞体ストレスを軽減する4-PBAとTUDCA、アミロイド様タンパクの凝集抑制効果が報告されているcompound147を培養液に添加し、細胞内封入体（小胞体における異常Fbg蓄積）の変化を蛍光抗体法で確認した。添加濃度や反応日数をいくつかのパターンで検討したものの、いずれのケミカルシャペロンにおいても封入体陽性率が低下するような変化は確認されず異常Fbgの蓄積軽減を示唆するデータを得ることはできなかった。
一連の研究期間にて、1)リコンビナント異常Fbgの機能解析（γG284RとγD316N）において、フィブリン重合反応に異常を認めたこと（2021年度）、2)FSDモデル細胞において小胞体ストレス応答に関連したタンパクの検出が確認できないこと（2022年度）を明らかにした。これらの結果ならびに2023年度の結果を踏まえると、FSD型変異において小胞体内に異常Fbgが蓄積する病態は小胞体ストレス応答やアミロイド凝集とは異なる機序が関与している可能性が考えられ、現時点ではFSD型変異を有する異常Fbgにおける機能異常の詳細を明らかにすることが病態解明への鍵であると考えている。FSDモデル細胞から回収できるリコンビナント異常Fbgの濃度が低いために機能解析に必要なFbg量を確保することが困難ではあるが、今後はこの課題を解決しつつ未解析の変異についても機能解析を計画している。
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Report
(3 results)
Research Products
(17 results)
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[Journal Article] Automated screening procedure for phenotype of congenital fibrinogen disorder using novel parameters, |min1|c and Ac/|min1|c obtained from clot waveform analysis of Clauss method2021
Author(s)
Arai S, Kamijo T, Kaido T, Yoda M, Shinohara S, Suzuki T, Arai N, Sugano M, Uehara T, Okumura N.
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Journal Title
Clinica Chimica ACTA
Volume: 521
Pages: 170-176
DOI
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Peer Reviewed
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