| Project/Area Number |
21K15971
|
|---|
| Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
|
| Allocation Type | Multi-year Fund |
|---|
| Review Section |
Basic Section 53010:Gastroenterology-related
|
|---|
| Research Institution | Nagoya University |
|---|
Principal Investigator |
石川 恵里 名古屋大学, 医学部附属病院, 病院助教 (70872894)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
|
| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
|
| Budget Amount *help |
¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
Fiscal Year 2021: ¥2,860,000 (Direct Cost: ¥2,200,000、Indirect Cost: ¥660,000)
|
|---|
| Keywords | 炎症性腸疾患関連腫瘍 / 潰瘍性大腸炎 / 炎症性腸疾患関連大腸癌 / Epstein-Barr virus |
|---|
| Outline of Research at the Start |
炎症性腸疾患（IBD）の慢性炎症に伴い発症する大腸腫瘍は、IBDに対して免疫抑制治療が施されている状態でもあり、その免疫微小環境の解析は炎症性発癌の病態解明に重要である。本研究では、腫瘍化したIBD炎症組織の免疫微小環境におけるEpstein-Barr virus関与の評価、免疫組織化学染色によるPD-L1発現の評価、デジタルカウント遺伝子発現解析によるがん免疫関連遺伝子の網羅的発現解析を施行し、免疫微小環境における炎症性発癌のkeyとなる新たな因子の同定を目指す。
|
| Outline of Annual Research Achievements |
炎症性腸疾患関連大腸腫瘍における腫瘍微小環境の特殊性を明らかにするために腫瘍細胞と免疫細胞のEpstein-Barr virus（EBV）の発現をEBER in situ hybridizationにより評価した。まずは一部の症例でEBVの評価を行ったが、腫瘍細胞・免疫細胞ともにEBV発現が同定できた症例は1例も認められなかった。そのためそれ以上のさらなる追加症例における検索は断念した。そのほかに微小環境に影響を及ぼす因子として細胞障害性T細胞、マクロファージ、制御性T細胞の浸潤を、それぞれ抗CD8抗体（clone C8/144B）、抗CD163抗体（clone 10D6）、抗FoxP3抗体（clone 236A/E7）を用いて免疫組織化学染色により評価した。免疫染色結果を定量化する様々な方法を模索し、最終的に再現性、客観性の高かった画像解析ソフトHALOをバーチャルスライドシステムと組み合わせて用いることとした。腫瘍内領域と腫瘍辺縁領域の陽性細胞数をそれぞれカウントした。陽性細胞数が多い部分を0.5mm2×10カ所ずつ抽出し、1mm2あたりの陽性細胞数を算出し比較した。Preliminaryな解析では、腫瘍内領域、腫瘍辺縁領域のCD8陽性T細胞はいずれもLGD/HGD/Tis、T1、T2-4と深達度の進行に伴い増加傾向であった。マクロファージ、制御性T細胞についても引き続き解析を進めており、臨床因子とのさらなる関連を解析している。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
免疫染色結果を定量化するために、再現性・客観性の向上を目指して様々な方法を模索した結果、解析手法の同定に当初の計画よりも時間を要した。
|
| Strategy for Future Research Activity |
微小環境に影響を及ぼす因子の探索のため腫瘍内、腫瘍浸潤部のCD8、CD163、FoxP3陽性細胞数と臨床因子を比較しその関連を明らかにする。また炎症性腸疾患関連大腸腫瘍の特殊性を明らかにするために、一部症例についてホルマリン固定パラフィン包埋切片由来の未染標本よりRNA抽出を行い、RNA品質が十分であった12例についてPanCancer Immune Profilingパネルを用いてデジタルカウント遺伝子発現解析（nCounter）を施行し、通常の大腸腫瘍と比較検討を行うことで、腫瘍微小環境の相違を明らかにする。
|
