新規分子標的治療薬による造精障害メカニズムの解明と精巣毒性バイオマーカーの確立
Project/Area Number |
21K16756
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Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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Allocation Type | Multi-year Fund |
Review Section |
Basic Section 56030:Urology-related
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Research Institution | Nagoya City University |
Principal Investigator |
野崎 哲史 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 研究員 (50813432)
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Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2023: ¥910,000 (Direct Cost: ¥700,000、Indirect Cost: ¥210,000)
Fiscal Year 2022: ¥2,080,000 (Direct Cost: ¥1,600,000、Indirect Cost: ¥480,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
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Keywords | 精巣毒性 / エピゲノム / 精子形成 |
Outline of Research at the Start |
思春期・若年成人がん患者における男性の妊孕性温存は重要な課題である。近年、エピゲノム変化を介した新規治療薬が開発、臨床応用されつつある。しかし、これらの薬剤の造精機能への影響の評価は十分でなく、精巣毒性をモニターできるバイオマーカーに乏しいのが現状である。 これまで私たちは、LSD1阻害剤が造精障害を引き起こすことを病理組織学的に明らかにしてきた。しかし造精障害をモニターできるパラメーターがないため、既に不可逆的な変化が生じてしまっている危険性がある。そこで本研究では、新規がん治療薬による造精障害のメカニズムを解明し、精巣毒性を予測するバイオマーカーを確立することを目的とする。
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Outline of Annual Research Achievements |
ヒストン脱メチル化酵素Lysine Specific Demethylase 1 (LSD1)阻害剤であるNCL1を用いて、Invitro実験を行った。まず、マウスの精原細胞株であるGC-1を用いてChIP-qPCRアッセイを行った。次に、GC-1、マウスのライディッヒ細胞株であるTM3、マウスのセルトリ細胞株であるTM4を用いて、WST assayで細胞増殖能を、flow cytometryでアポトーシスを評価した。 LSD1阻害剤はH3K4の脱メチル化を阻害し、がん増殖を抑制する。また、H3のメチル化は、Oct4によって抑制的に制御されることが知られている。そのため、ChIP-qPCRアッセイでは、H3K4me2抗体で免疫沈降を行い、Oct4のプロモーター領域のプライマーを作成し、qPCRを行うことで評価した。その結果、Oct4のメチル化状態が変化していた。 WST assay では、GC1,TM3,TM4の各細胞に、0, 5,10,20,30 uMの濃度のNCL1を投与し、WST8で評価した。結果、NCL1の濃度依存的にGC-1の増殖抑制をみとめたが、TM3、TM4ではみられなかった。 Flow cytometryでは、GC1,TM3,TM4の各細胞に、NCL1 30uMを投与し、7AAD, PE AnexinⅤで評価した。結果、GC1では、アポトーシスの増加をみとめたが、TM3、TM4ではみられなかった。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
NCL1投与におけるin vitro実験は概ね完了している。
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Strategy for Future Research Activity |
次年度は、精巣毒性メカニズムをさらに解明するとともに、ヒト精巣検体を用いた解析も行う予定である。
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Report
(2 results)
Research Products
(4 results)