miRNA-146a-5pを用いた膀胱癌の新規診断・治療法の開発とその機能解析
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21K16759
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Review Section |
Basic Section 56030:Urology-related
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| Research Institution | St. Marianna University School of Medicine |
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Principal Investigator |
薄場 渉 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 助教 (90867649)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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| Budget Amount *help |
¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
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| Keywords | 膀胱癌 / miR-146a-5p / TET2 / 診断マーカー / miRNA-146a-5p / エクソソーム / 膀胱腔内注入療法 |
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| Outline of Research at the Start |
再発・病期進展の可能性が高い筋層非浸潤性膀胱癌に対する新規診断法と膀胱内注入療法の確立を目指し、尿中エクソソームに内包されているmiR-146a-5pを新規バイオマーカーとして確立するとともに、膀胱癌組織における血管新生やサイトカインとの関連を検証する。また、網羅的発現解析により膀胱癌における血管新生に関連するmiR-146a-5p の標的遺伝子を同定する。さらにin vivo研究にてmiR-146a-5pが膀胱癌の増殖を制御するメカニズムを解明し、癌の進展や悪性化への寄与を明らかにする。最終的にはmiR-146a-5pおよびその標的遺伝子を用いて新規の膀胱癌治療法の確立を目指す。
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| Outline of Annual Research Achievements |
再発・病期進展の可能性が高い筋層非浸潤性膀胱癌に対する低侵襲かつ高精度のバイオマーカーの発見、新たな膀胱内注入療法の確立を目的として、miR-146a-5pに関連する研究を行った。
本年度はまず、昨年度miR-146a-5pの標的遺伝子として同定したTET2 について、3-UTRアッセイを用いてmiR-146a-5pがTET2を直接標的としていることを証明した。次に、エクソソーム内miR-146a-5pおよびTET2遺伝子のヒト臍帯血管内皮細胞（HUVEC）における影響を詳細に検討した。siRNAを用いてHUVECのTET2の発現をノックダウンしたところ、HUVECの増殖能が促進された。これはTET2がDNA脱メチル化の調節因子であり、その発現が悪性腫瘍における腫瘍抑制因子であるという報告を裏付ける結果であった。また、miR-146aを過剰発現させたJ82細胞のEVあるいは合成miR-146a をHUVECに添加し、mRNAおよび蛋白レベルの発現を解析したところ、どちらにおいてもmRNA 、蛋白共にTET2の発現が抑制されることが示された。さらにTET2の下流で働く因子について、マイクロアレイ解析の結果からターゲットをしぼり発現解析を行った結果、TET2 はc-mycを介して、膀胱癌の血管新生を促進していることが明らかになった。また、免疫組織化学染色にて膀胱癌における血管新生とTET2の局在を確認したところ、TET2と血管内皮マーカーであるCD31は同じ場所に局在が見られ、TET2発現が低下している標本ではCD31発現が亢進していた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
概要に示したように、miR-146a の標的遺伝子が真にTET2であることを証明し、c-mycを介して膀胱癌における血管新生を促進することを明らかにし、研究は予定通り順調に進んでいる。
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| Strategy for Future Research Activity |
・同所性膀胱癌モデルマウスにおけるmiR-146aの腫瘍増殖および血管新生能への影響を、本年度同定したTET2遺伝子などを指標として解析する。
・同所性膀胱癌モデルマウスに対するmiR-146aならびにTET2をターゲットした膀胱腔内注入療法について検討する。
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Report
(2 results)
Research Products
(3 results)
