上皮バリア低下による眼表面炎症の増悪メカニズムの解明
| Project/Area Number |
21K16896
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Review Section |
Basic Section 56060:Ophthalmology-related
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| Research Institution | Kochi University |
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Principal Investigator |
岸本 達真 高知大学, 教育研究部医療学系臨床医学部門, 助教 (60783751)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,950,000 (Direct Cost: ¥1,500,000、Indirect Cost: ¥450,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
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| Keywords | アレルギー性結膜炎 / MUC16 / LPS角膜炎 / ブタクサ花粉（Ragweed：RW） / ドライアイ / アレルギー性結膜疾患 |
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| Outline of Research at the Start |
眼表面のバリアは角結膜の上皮細胞の上皮間結合とムチンや涙液からなる。眼表面のバリアと眼表面炎症には密接な関係性があると考えられるが、眼炎症性疾患をバリアの観点からその病態を明らかにする研究はこれまでほとんど見られない。本研究では、二種類のバリア機能障害モデル（涙腺摘出した涙液減少型ドライアイモデルおよびMUC16KOマウス）を用いて、①アレルギー性結膜炎、②自然免疫型角膜炎（LPS誘導角膜炎）を誘導して、眼表面のバリア機能の低下により眼表面の炎症に関わる細胞・分子を同定し、眼表面炎症の悪化サイクルを阻止することを目標とする。
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| Outline of Annual Research Achievements |
これまで野生型マウスおよびMUC16欠損マウスにドライアイを誘導し、角膜上皮障害の程度に差があるかについて検討したが、差は見られなかったためドライアイは誘導せず、野生型とMUC16の欠損マウスによる炎症反応の増悪について比較することとした。
マウスに、三種混合麻酔薬を腹腔内注射し全身麻酔をかけ、26G針にて角膜上皮に擦過傷を作ったのちに緑膿菌由来のLPSを1μg/5ul点眼し角膜炎を誘導した。LPS点眼の6時間後にマウスを安楽死させ、眼瞼を含む眼球を摘出し、角膜を摘出した。摘出角膜のRNAを抽出後、cDNAを作製してqRT-PCRを行い、IL-1β mRNA、IL-12 mRNA、IL-6 mRNA、MIP-2 mRNA、TNF-α mRNA、MUC1 mRNAおよびMUC4 mRNAなどについて、角膜サイトカインプロファイルを検討した。
Muc 16を欠損することで、同じ膜型ムチンであるMuc 1およびMuc 4の発現が低下することで、炎症誘導性サイトカインであるIL-1βやMIP-2などのサイトカインの発現が上昇していた。摘出角膜への好中球数を計測したところ、野生型マウスと比較し、MUC16欠損マウスで有意に好中球数が増加していた。以上から、MUC16欠損することで、膜型ムチンの発現低下により好中球の遊走を促進することで炎症性サイトカインの発現を上昇している可能性が考えられた。
研究期間全体を通した結果として、引っ掻き回数、臨床所見ともにブタクサ花粉（Ragweed：RW）による免疫を行った群で野生型と比較しMUC16欠損マウスで有意に増加しており、野生型と比較し、MUC16欠損マウスで有意に好酸球浸潤数は低下した。また、MUC16欠損により、好中球の遊走が促進され、炎症性サイトカインの発現が上昇した。
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Report
(3 results)
Research Products
(13 results)
