CRISPR/Cas9法による扁平上皮癌細胞におけるFGF結合蛋白の機能解析
| Project/Area Number |
21K17141
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Review Section |
Basic Section 57060:Surgical dentistry-related
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
檜垣 美雷 広島大学, 病院(歯), 助教 (40826856)
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| Project Period (FY) |
2021-04-01 – 2025-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
Fiscal Year 2021: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
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| Keywords | 遺伝子ノックアウト / HBp17 / FGFBP-1 / 扁平上皮癌 / CRISPR / Cas9 |
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| Outline of Research at the Start |
Heparin-binding protein 17/FGF-Binding Protein-1 (HBp17/FGFBP-1)は、上皮細胞で特異的に発現する分泌蛋白であり、これまでわれわれはHBp17/FGFBP-1が扁平上皮癌（SCC）細胞における細胞増殖や造腫瘍性に深く関わることを報告してきた。しかしこれまでの研究では、HBp17/FGFBP-1の発現は抑制されたが、消失することはなかった。そこで本研究では、SCCにおけるHBp17/FGFBP-1のさらなる機能解析を目的に、CRISPR/Cas9を用いたHBp17/FGFBP-1発現のノックアウトが及ぼす影響を明らかにする。
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| Outline of Annual Research Achievements |
扁平上皮癌細胞におけるHeparin-binding protein 17/FGF-Binding Protein -1（以後、HBp17）遺伝子をCRISPR / Cas9システムを用いて欠失させた細胞株を作成し、ウェスタンブロット法において当該蛋白質の消失を確認した。作成したHBp17ノックアウト扁平上皮癌細胞株（以後、HBp17-KO-SCC）においてin vitroで、親株と比較して細胞増殖能や、細胞運動能が著明に低下していた。また、同細胞をヌードマウス背部皮下に細胞を移植すると、HBp17-KO-SCC細胞において、腫瘍増殖能が親株と比較して著明に低下し、一部クローンにおいては造腫瘍性の欠失を認めた。さらにHBp17 KOによる遺伝子発現の変化を網羅的に解析するため、HBp17-KO-SCCにおけるマイクロアレイ解析及びプロテオーム解析を行った。両者の解析によって発現に差を認めた、FABP5、SPRR1A、SPRR1B、INV、LOR、FLGに関して定量PCR法にて遺伝子の発現量を解析しウェスタンブロット法及び免疫蛍光染色法にてタンパク質発現を解析した。アップレギュレートされた遺伝子およびタンパク質は、主に角化、表皮の発達に関連しており、HBp17-KO-SCCの効果を示していた。これはHBp17-KO-SCCが終末分化の誘導を介して、SCC細胞やOSCC細胞の増殖や運動性を抑制することを示唆する結果であった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
計画していた実験において想定していたデータが得られているが、予定していた計画からは若干の遅れが生じている。
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| Strategy for Future Research Activity |
実臨床における扁平上皮癌の病理組織標本での分化度におけるHBp17発現及び患者血清中のHBｐ１７発現に関する検討及び、生存率との関連性を検討する。
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Report
(3 results)
Research Products
(1 results)
