ヒト側頭骨病理標本アーカイブを用いた遺伝性難聴の病態解明に関する研究

Research Project

Project/Area Number	21K19560
Research Category	Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
Allocation Type	Multi-year Fund
Review Section	Medium-sized Section 56:Surgery related to the biological and sensory functions and related fields
Research Institution	Shinshu University
Principal Investigator	宇佐美真一信州大学, 医学部, 特任教授 (10184996)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	西尾信哉信州大学, 医学部, 特任講師 (70467166)
Project Period (FY)	2021-07-09 – 2024-03-31
Project Status	Granted (Fiscal Year 2022)
Budget Amount *help	¥6,370,000 (Direct Cost: ¥4,900,000、Indirect Cost: ¥1,470,000) Fiscal Year 2023: ¥2,340,000 (Direct Cost: ¥1,800,000、Indirect Cost: ¥540,000) Fiscal Year 2022: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000) Fiscal Year 2021: ¥2,210,000 (Direct Cost: ¥1,700,000、Indirect Cost: ¥510,000)
Keywords	遺伝子 / 次世代シークエンス / 難聴 / アーカイブ標本 / 標本 / 側頭骨標本 / アーカイブ / 病態解明
Outline of Research at the Start	本研究は、UCLA耳鼻咽喉科の石山明教授との共同研究により、同大学の管理する世界最大の側頭骨病理標本アーカイブを活用し、難聴患者のヒト側頭骨病理標本よりDNAを抽出し、次世代シークエンサー（NGS）を用いた解析を行い、難聴の原因遺伝子変異を明らかにすることで、遺伝性難聴の病理・病態を明らかにすることを目的としている。
Outline of Annual Research Achievements	先天性難聴は新生児1,000人に1人に認められる比較的頻度の高い疾患である。難聴患者の遺伝子解析を行い、原因遺伝子変異を明らかにすることは、原因診断として臨床上有用であり、保険診療として一般的な検査となってきている。しかしながら、内耳は骨に囲まれた組織であり、生検が困難であるため、実際のヒト内耳における病理・病態に関してはほとんど明らかとなっていない。本研究は、カリフォルニア大学ロサンゼルス校(UCLA)耳鼻咽喉科の石山明教授との共同研究により、同大学の管理する世界最大の側頭骨病理標本アーカイブを活用し、ヒト側頭骨病理標本よりDNAを抽出し、次世代シークエンサー(NGS)を用いた解析を行い、原因遺伝子変異を明らかにすることで、遺伝性難聴の病理・病態を明らかにすることを目的としている。本年度は前年度までの研究を継続し、UCLAの管理する世界最大の側頭骨病理標本アーカイブからセロイジン包埋ヒト側頭骨病理標本を送付し、信州大学でセロイジン包埋ヒト側頭骨病理標本からDNA抽出するためのプロトコール開発を進めた。具体的にはエタノール/ジエチルエーテル混和物で1週間程度溶解した後にエタノーエルで複数回洗浄しDNAを抽出するプロトコルを確立した。得られたDNAを基に次世代シークエンサー(NGS)解析用のライブラリの調整を行い、得られたライブラリを用いて次世代シークエンス解析を行った。その結果、複数の候補となるバリアントを検出することができた。現在、見出されたバリアントの病的意義に関して検討をおこなっている。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 当初計画どおり、UCLAからのサンプルを受領しDNA抽出、NGSライブラリの作成、NGS解析を行うことができた。
Strategy for Future Research Activity	次年度以降はさらに症例数を増やしてNGS解析を進めるとともに原因遺伝子変異が同定された症例の組織学的検討を進める計画である。