FOXO1抑制によるCAFs特異的細胞死誘導のメカニズムの解明

Research Project

Project/Area Number	21K20849
Research Category	Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
Allocation Type	Multi-year Fund
Review Section	0901:Oncology and related fields
Research Institution	Tokyo Dental College
Principal Investigator	小山拓洋東京歯科大学, 歯学部, 非常勤歯科医師 (50906386)
Project Period (FY)	2021-08-30 – 2024-03-31
Project Status	Granted (Fiscal Year 2022)
Budget Amount *help	¥2,990,000 (Direct Cost: ¥2,300,000、Indirect Cost: ¥690,000) Fiscal Year 2022: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000) Fiscal Year 2021: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Keywords	CAFs / FOXO1 / Cancer microenvironment
Outline of Research at the Start	がん微小環境中に豊富に存在する線維芽細胞 (CAFs: carcinoma-associated fibroblasts)は、がん細胞や様々な間質細胞との相互作用を介して、血管新生、炎症、免疫抑制、がん浸潤・転移や治療抵抗性を促進することが知られているが、その分子メカニズムの理解は十分ではない。また、CAFsを標的にした薬剤のがん抑制効果がマウスで報告されているが、いずれの薬剤もCAFs特異性や副作用に関しては不明確であり臨床応用には至っていない。本研究ではFOXO1抑制によりCAFsに特異的に誘導される細胞死の分子メカニズムを解明し、新規CAFs標的がん治療法の開発を目的とする。
Outline of Annual Research Achievements	1. FOXO1抑制剤によるCAFs特異的な細胞死誘導分子メカニズムの解明について AS1842856添加12,24時間前後の細胞死がまだ誘導されていないCAFsを用いてRNAシークエンスを施行しました。同じサンプルを用いてメタボローム解析を行ったが、ターゲット因子の特定となるシーズは見つけられていない。また抗FOXO1抗体を用いた免疫沈降や網羅的オープンクロマチン領域解析 (ATAC-Seq)に関しても、RNAシークエンスの結果を加味し、慎重にサンプルを選定しつつ、施行の準備をしている。メカニズムの解明については、上記の実験結果を加味しつつ、ターゲット因子を絞り込みつつシグナルの変化の調査を行う予定である。 2.FOXO1 抑制によるCAFs の選択的な死滅によるがん悪性化抑制の検証について FOXO1-shRNAが導入されたCAFsと乳がん細胞をマウスに共移植し、がん増殖、浸潤・転移能や治療抵抗性の評価に関しては、昨年までに実験が終了し、概ね予測された結果が出ている。しかし、米国のジャクソン研究所よりFOXO1 コンディショナル欠損マウス、MMTV-PyMT 乳がん自然発症マウスと線維芽細胞特異的プロモーター（periostin やcollagen type Ia2）依存性Cre 発現マウスを購入、交配して実験を行ったが、予想と異なる結果が出ており、再度実験プランの構成を行なっている。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 3: Progress in research has been slightly delayed. Reason 新型コロナ感染症による実験の停止期間や、物流の停止による実験遅延、また予想されていた実験結果とは異なる結果が出ており、再度構想が必要になっているため。
Strategy for Future Research Activity	来年度の目標達成の為、鋭意実験を進めている。また実験助手の協力を仰ぎ、実験スピードの改善を行なっている。また得られた実験結果の解析に関しても、ハードウェア購入により解析スピードが上昇しつつある。