GPCRシグナル複合体細胞内輸送の時空間的制御に関する検討

• Project/Area Number: 22590234
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Section: 一般
• Research Field: General pharmacology
• Research Institution: Tohoku University
• Principal Investigator: 柳澤 輝行 東北大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (90133941)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 佐藤 岳哉 東北大学, 大学院・医学系研究科, 助教 (10312696)
• Project Period (FY): 2010 – 2012
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2011)
• Budget Amount: ¥3,380,000 (Direct Cost: ¥2,600,000、Indirect Cost: ¥780,000); Fiscal Year 2011: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000); Fiscal Year 2010: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000)
• Keywords: 受容体 / チャネル / 輸送系 / シグナル情報伝達系

Research Abstract

GHRH受容体のGHRH刺激後の細胞表面発現量変動についての検討
昨年度作成したGHRHRとタンパク質A両者を発現する細胞系を用いて、この受容体がGHRH刺激後に、細胞表面受容体発現量がどのように変化するのか、またタンパク質Aの発現が受容体の細胞表面発現にどのように影響するかについて抗GHRHR抗体を用いる蛍光免疫染色を行い、Flowcytometry法により定量を行った。その結果、受容体全長を発現させたものでは、GHRH刺激により受容体の細胞表面発現量が経時的に増加したのに対し、受容体のC末4アミノ酸欠損させたものではGHRH刺激にもかかわらず受容体の細胞表面発現量は変化しなかった。これは、受容体のC末4アミノ酸が受容体の細胞表面発現量は変化に重要であることを考えている。さらに受容体と相互作用する細胞内タンパク質Aを受容体とともに共発現させるとGHRH刺激後、一過性に受容体の細胞表面発現量は減少したがその後、増加に転じた。受容体の細胞表面発現量はリガンドであるGHRH刺激後増加したが、タンパク質A存在下では受容体の細胞内トラフィックが変化することが明らかになった。
GHRHRのシグナル伝達におけるタンパク質Aの関与の検討
GHRHRは、Gsタンパク質共役型GPCRであり、リガンドであるGHRHの結合により、細胞内cAMP濃度を亢進する。このGHRH刺激による細胞内cAMP濃度亢進においてGHRHRとタンパク質Aとの相互作用がどのように影響を与えているかについて検討を行った。すな診ち、cAMP濃度の細胞内変化をcAMP濃度に応答するプロモータとしてCRE(cAMP response element)、リポーター遺伝子のルシフェラーゼ遺伝子を組み込んだプラスミドをGHRHRとタンパク質Aを発現する細胞にトランスフェクションを行い、cAMPレポーターアッセイ系の確立を行った。

Research Products

• [Journal Article] The hydrophobic amino acids in putative helix 8 in carboxy-terminus of histamine H3 receptor are involved in receptor-G-protein coupling (2011)
  • Author(s): Kuramasu A., Sukegawa J., Sato T., Sakurai E., Watanabe T., Yanagisawa T., Yanai K.
  • Journal Title: Cellular Signalling Volume: 23 Pages: 1843-1849
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Vezatin, a potential target for ADP-ribosylation factor 6, regulates the dendritic formation of hippocampal neurons. (2010)
  • Author(s): Sanda M, Ohara N, Kamata A, Hara Y, Tamaki H, Sukegawa J, Yanagisawa T, Fukunaga K, Kondo H, Sakagami H.
  • Journal Title: Neurosci Res. Volume: 67 Pages: 126-136
  • Peer Reviewed
• [Presentation] AZT誘発致死性ミオパチーは、酸化ストレスにより誘発される (2012)
  • Author(s): 柳澤輝行、野村亮介、助川淳、佐藤岳哉
  • Organizer: 第41回日本脈管作動物質学会年会
  • Place of Presentation: 秋田市
• [Presentation] PICK1とGHRHRの相互作用は、GHRHRの細胞表面発現を制御する (2012)
  • Author(s): 佐藤岳哉、伊東萌、鈴木夕起、助川淳、柳澤輝行
  • Organizer: 第85回日本薬理学会年会
  • Place of Presentation: 京都市
• [Presentation] AZT誘発ミトコンドリア機能不全の分子機構解析 (2012)
  • Author(s): 野村亮介、久志本成樹、柳澤輝行、佐藤岳哉
  • Organizer: 第85回日本薬理学会年会
  • Place of Presentation: 京都市
• [Presentation] AZT誘発心筋ミトコンドリア機能障害は、酸化ストレスによるものである (2011)
  • Author(s): 佐藤岳哉、野村亮介、助川淳、柳澤輝行
  • Organizer: 第62回日本薬理学会北部会
  • Place of Presentation: 仙台市
• [Presentation] 抗ガン治療法としてのTmpk/AZT系におけるBystander効果発現の分子機構 (2010)
  • Author(s): 佐藤岳哉、鈴木夕起、伊東萌、助川淳、柳澤輝行
  • Organizer: 第61回日本薬理学会北部会
  • Place of Presentation: 札幌市
  • Year and Date: 2010-09-10