ＲＴーＬＡＭＰ法を用いたアルボウイルスの網羅的検索

• Project/Area Number: 22790587
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Public health/Health science
• Research Institution: Osaka Prefectural Institute of Public Health
• Principal Investigator: 青山 幾子 大阪府立公衆衛生研究所, その他部局等, 研究員 (90332452)
• Project Period (FY): 2010-04-01 – 2015-03-31
• Project Status: Declined (Fiscal Year 2014)
• Budget Amount: ¥5,969,664 (Direct Cost: ¥4,592,050、Indirect Cost: ¥1,377,614); Fiscal Year 2014: ¥969,832 (Direct Cost: ¥746,025、Indirect Cost: ¥223,807); Fiscal Year 2013: ¥969,832 (Direct Cost: ¥746,025、Indirect Cost: ¥223,807); Fiscal Year 2012: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000); Fiscal Year 2011: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000); Fiscal Year 2010: ¥1,950,000 (Direct Cost: ¥1,500,000、Indirect Cost: ¥450,000)
• Keywords: RT-LAMP / 感染症 / ウイルス

Research Abstract

アルボウイルス感染症により、毎年海外で多数の感染者や死者が報告されており、わが国に入ってくる感染症も多様化している。これら感染症に対する検査法の確立は急務であり、本研究課題ではアルボウイルスの鑑別を、従来法よりも、より簡便で短時間に行う方法の開発を目的とする。本研究の対象として蚊媒介性疾患のフラビウイルスとアルファウイルス感染症をモデルとし、RT-LAMP(real-time reverse transcription-loop-mediated isothermal amplification assay)法もしくはGENECUBE法を用いた網羅的検索法を構築する。本法により、アウトブレイク時に検体が急増しても迅速に対応することが可能となり、ベクターサーベイランスなど多検体のスクリーニングも簡便に実施できる。さらに、網羅的検索により未知のウイルスを検出することも可能となる。
平成24年度は、RT-LAMP法用に作成したプライマーの感度が従来の遺伝子増幅法に比べ低かったため、RT-LAMP法と同様に短時間で反応ができ、かつ全自動で遺伝子解析が可能なGENECUBE Qprobe法を用いて、アルボウイルスの迅速診断法の開発を進めた。日本脳炎ウイルス、デングウイルス、ウエストナイルウイルスについて作成した検出系は、検出感度が現行のRT-PCR法やrealtimePCR法と同等もしくはそれ以上であり、作業が簡便かつ迅速であることから、非常に有用な検出法だと考えられた。今後、さらに網羅的検索ができるようプライマーを設計し、目的に応じて適した検査法を選択できるよう迅速診断法を確立する。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

GENECUBE法用に作成した特異的プライマーは高感度で反応性がよく、現在臨床検体について検討中で概ね良い成績であるが、共通プライマーについてはまだ反応性が確かめられておらず、今後の検討課題となっている。

Strategy for Future Research Activity

RT-LAMP法のプライマー感度が低いため、主としてGENECUBE法による検出法の開発に取り組んでいる。全自動遺伝子解析装置GENECUBEは、検体の遺伝子抽出から核酸増幅、検出、判定までが1時間半程度で終了するため、RT-LAMPよりもさらに迅速性が高いと考えられ、また本機械は一検体に対し、多項目のウイルス検索が同時に実施でき、少ない検体から多項目を検査することの多い地方衛生研究所においてかなり汎用性があると考えられる。本年度はアルボウイルス検出に関して、GENECUBE法用の検出系を検討し、高感度の検出法を得た。この実験診断法が確立すると、より効率的で高性能な診断法が導入でき、より迅速な感染症対策に寄与できることが期待される。

Research Products

• [Journal Article] 大阪府におけるウエストナイルウイルスに対するサーベイランス調査(2011) (2012)
  • Author(s): 青山幾子、弓指孝博, 他
  • Journal Title: 大阪府立公衆衛生研究所報告 Volume: 50 Pages: 1-7
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] 日本脳炎の現状と予防接種 (2012)
  • Author(s): 青山幾子
  • Journal Title: 大阪公衆衛生 Volume: 83 Pages: 18-19
  • NAID: 120007140714
• [Journal Article] 大阪府におけるウエストナイルウイルスに対するサーベイランス調査(2010) (2011)
  • Author(s): 青山幾子、弓指孝博, 他
  • Journal Title: 大阪府立公衆衛生研究所報告 Volume: 49 Pages: 1-6
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] 大阪府におけるウエストナイルウイルスに対するサーベイランス調査(2009) (2010)
  • Author(s): 青山幾子、弓指孝博, 他
  • Journal Title: 大阪府立公衆衛生研究所報告 Volume: 48 Pages: 1-7
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 成人における日本脳炎ワクチンに対する抗体応答 (2012)
  • Author(s): 青山幾子、弓指孝博、加瀬哲男, 他
  • Organizer: 第86回日本感染症学会総会
  • Place of Presentation: 長崎
  • Year and Date: 2012-04-26
• [Presentation] Analysis of amino acid sequence of HBGA-binding sites in Norovirus GII.4 ORF2 from six patients including a weak-secretor in the same region within the period of one month (2011)
  • Author(s): 依田知子、山崎謙治、青山幾子
  • Organizer: 第59回日本ウイルス学会(International Union of Microbiological Societies Congresses of Virology)
  • Place of Presentation: 札幌
  • Year and Date: 2011-09-12
• [Presentation] 大阪府内にて発生した日本紅斑熱の1例 (2011)
  • Author(s): 井村慎志、鈴木啓之、青山幾子, 他
  • Organizer: 第194回日本内科学会近畿地方会
  • Place of Presentation: 奈良
  • Year and Date: 2011-06-11
• [Presentation] 日本脳炎ワクチン接種によるウエストナイルウイルスに対する交差中和抗体の獲得 (2010)
  • Author(s): 青山幾子、弓指孝博, 他
  • Organizer: 第56回 日本ウイルス学会学術集会
  • Place of Presentation: あわぎんホール(徳島市)
  • Year and Date: 2010-11-08
• [Presentation] チクングニヤ熱においてIgM抗体が持続した1症例 (2010)
  • Author(s): 青山幾子、弓指孝博, 他
  • Organizer: 第51回 日本臨床ウイルス学会
  • Place of Presentation: サンポート高松(高松市)
  • Year and Date: 2010-06-20
• [Presentation] 大阪府におけるデング熱・チクングニヤ熱の検査体制 (2010)
  • Author(s): 青山幾子、弓指孝博, 他
  • Organizer: 衛生微生物技術協議会 第31回研究会
  • Place of Presentation: かごしま県民交流センター(鹿児島市)
  • Year and Date: 2010-05-26