mRNP精製システムを用いたmiRNA作用機序の解析

• Project/Area Number: 22870027
• Research Category: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Molecular biology
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 泉 奈津子 The University of Tokyo, 分子細胞生物学研究所, 助教 (50579274)
• Project Period (FY): 2010 – 2011
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2011)
• Budget Amount: ¥2,639,000 (Direct Cost: ¥2,030,000、Indirect Cost: ¥609,000); Fiscal Year 2011: ¥1,378,000 (Direct Cost: ¥1,060,000、Indirect Cost: ¥318,000); Fiscal Year 2010: ¥1,261,000 (Direct Cost: ¥970,000、Indirect Cost: ¥291,000)
• Keywords: miRNA / mRNP / 翻訳抑制

Research Abstract

miRNA(micro RNA)は、標的mRNAの3'非翻訳領域(UTR)に結合することにより、その発現を抑制する。本研究は、miRNA結合によるmRNP(mRNA-タンパク質複合体)の変化に着目した解析から、特に翻訳抑制におけるmiRNAの作用実態を明らかにすることを目的としている。本年度は細胞内からmRNPを精製する手法の確立を目指した。
mRNPを精製するため、特定のRNA2次構造と結合することが知られている3種のタンパク質(λN、PP7CP、L7Ae)を用いて培養細胞に発現させたレポーターmRNPの精製を試みたところ、λN、PP7CPの非特異的結合が少なく、mRNP精製に有効であることがわかった。しかしいずれを用いた場合にもレポーターmRNPの回収効率が非常に低い上に、回収したmRNPが精製用の磁気ビーズから効率よく溶出されないという問題があることが判明した。そのため当初計画していた解析を進めるには大幅なスケールアップが必要であり、現在実験系の見直しとmRNP精製の条件を再検討している。

Research Products

• [Journal Article] The nonsense-mediated mRNA decay SMG-1 kinase is regulated by large-scale conformational changes controlled by SMG-8. (2011)
  • Author(s): Arias-Palomo E, Yamashita A, Fernandez IS, Nunez-Ramirez R, Bamba Y, Izumi N, Ohno S, Llorca O.
  • Journal Title: Genes and Development Volume: 15 Pages: 153-164
  • Peer Reviewed