過剰歯由来iPS細胞によるバイオリサイクル研究システムの研究
Project/Area Number |
22890147
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Research Category |
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
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Allocation Type | Single-year Grants |
Research Field |
Orthodontic/Pediatric dentistry
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Research Institution | Kagoshima University |
Principal Investigator |
齋藤 陽子 (齊藤 陽子) 鹿児島大学, 医学部・歯学部附属病院, 助教 (30404487)
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Project Period (FY) |
2010 – 2011
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Project Status |
Completed (Fiscal Year 2011)
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Budget Amount *help |
¥2,977,000 (Direct Cost: ¥2,290,000、Indirect Cost: ¥687,000)
Fiscal Year 2011: ¥1,417,000 (Direct Cost: ¥1,090,000、Indirect Cost: ¥327,000)
Fiscal Year 2010: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
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Keywords | 再生医学 / バイオリサイクル / 歯 / iPS細胞 |
Research Abstract |
本研究は過剰歯歯髄からiPS細胞を樹立することを目的に、平成22年度に遺伝子導入のためのプラスミドの増幅を行った。続いて患者から採取した過剰埋伏歯の歯髄細胞を、コラゲナーゼを用いて初代培養し、30日間培養維持した。 また、iPS細胞樹立に必要不可欠なFeeder細胞に関し、複数の異なる薬物耐性を持つFeeder細胞の樹立を試みた。CMVプロモータ下にHygromycin、Puromycin、NeomycinのいずれかとBleomycinの2種類の薬剤耐性遺伝子を持つプラスミドを作成しこれら3つのプラスミドを、それぞれSTO細胞へリポフェクション法にて遺伝子導入を行った。遺伝子導入後より2種類の薬剤にて遺伝子導入細胞の選択を行い、2か月間薬剤投与を続けた。樹立した細胞のES細胞未分化維持能を評価するため、Mitomycin C処理した樹立細胞上にて、muse ES細胞を播種・培養し、継代後のES細胞の形態学的変化について評価を行った。薬剤投与にて選別された、Hygromycin/Bleomycin耐性STO細胞(SHB細胞)、Puromycin/Bleomycin耐性STO細胞(SPB細胞)、Neomycin/Bleomycin耐性STO細胞(SNB細胞)を樹立した。いずれの細胞もSTO細胞とほぼ同じ細胞形態をしており、長期間培養維持が可能(18継代まで確認)であった。また、樹立細胞上に播種されたES細胞については、形態学的には変化は認められず、良好な継代維持が可能であった。 平成23年度には上記の手法を組み合わせ、過剰歯歯髄からiPS細胞を樹立するための直接的な実験を開始したが、本研究をベースとした研究が若手研究(B)に採用となり、本研究の廃止申請に至った。
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Report
(2 results)
Research Products
(1 results)
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[Presentation] 薬剤耐性feeder細胞の樹立2010
Author(s)
齊藤一誠, 野口洋文, 赤坂恵理, 岩瀬陽子(研究代表者), 山崎要一
Organizer
第37回 日本臓器保存生物医学会学術集会
Place of Presentation
新潟市
Year and Date
2010-11-20
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