ダイレクト法及び等温核酸増幅による体液特異的mRNAの迅速な検出

Research Project

Project/Area Number	22H04399
Research Category	Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
Allocation Type	Single-year Grants
Review Section	3240:Society medicine, nursing, and related fields
Research Institution	石川県警察科学捜査研究所
Principal Investigator	Kubo Seiji 石川県警察科学捜査研究所, 公務員
Project Period (FY)	2022-04-01 – 2023-03-31
Project Status	Completed (Fiscal Year 2022)
Budget Amount *help	¥330,000 (Direct Cost: ¥330,000) Fiscal Year 2022: ¥330,000 (Direct Cost: ¥330,000)
Keywords	RPA法 / ダイレクト法 / 血液 / ヘモグロビン / mRNA / 体液識別
Outline of Research at the Start	犯罪現場に遺留された試料について、体液種の同定は犯罪の立証に極めて重要である。mRNAは体液種の指標として有用なマーカーであるが、従来のRT-qPCR法による検出は時間と手間がかかる。本研究では、簡易的なRNA抽出法と等温増幅の反応系であるRT-RPA法を組み合わせることで、体液特異的なmRNAの迅速・簡便なスクリーニング法の開発を目指す。
Outline of Final Research Achievements	本研究では、等温増幅（42℃）かつ短時間（20分）の反応系であるRT-RPA法を利用し、血液の指標となるHemoglobin beta (HBB) mRNAを迅速・簡便に検出する方法を開発した。本法により、100 fg相当の白血球RNAあるいは1 nL相当の血液からHBBを検出することが可能であった。また、簡易的なRNA抽出法を組み合わせたダイレクトRT-RPA法により、30分程度でHBBの有無が判定可能となった。これらの結果から、RT-RPA法が血液のスクリーニング検査として有効であることが示唆された。
Academic Significance and Societal Importance of the Research Achievements	犯罪現場に遺留される試料について、体液種の証明は犯罪の立証に重要である。mRNAは体液識別の有用なマーカーであるが、従来のRT-qPCR法による工程は時間と手間がかかる。本研究で開発したRT-RPA法は、RT-qPCR法に比べて迅速・簡便な方法であり、法科学鑑定の効率化に貢献できると考えられる。また、反応温度（42℃）が低く、精密な温度管理が不要であることから、実験室だけではなく現場での利用が期待できる。