Project/Area Number |
22K05354
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Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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Allocation Type | Multi-year Fund |
Section | 一般 |
Review Section |
Basic Section 37030:Chemical biology-related
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Research Institution | Kyoto University |
Principal Investigator |
竹本 靖 京都大学, 化学研究所, 助教 (50453543)
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Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
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Keywords | ケミカルバイオロジー / ラジカル / タンパク質分解 |
Outline of Research at the Start |
本研究では、従来、非選択的と考えられてきたラジカルによるタンパク質分解が、実は選択性を有してタンパク質分解を誘導するのではないかという仮説のもと、研究を進める。まず、申請者等が発見したラジカル感受性ペプチドに着目し、1)ラジカル感受性ペプチドシグナルの発見、2)ラジカル感受性タンパク質の探索と理解、の二点について研究を行う。本研究は申請者自身の発見を切り口としており、独自性の高い研究を展開できると考えられる。また、神経変性疾患や虚血等の様々な疾患では、過剰にラジカルが生成することで病態が悪化する。従って、本研究を遂行することで、上記疾患の病態の進行の解明や治療薬の開発への貢献が期待される。
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Outline of Annual Research Achievements |
これまでに申請者は、スクアレン合成酵素(SQS)の阻害剤であるYM-53601を細胞に添加し、紫外線を照射すると、SQSが選択的に分解されることを発見した。このメカニズムを解析したところ、紫外線照射によりYM-53601が開裂してラジカルを生成し、これが起点となってタンパク質分解が誘導されること、そしてSQSのC末領域(371-397)が、このタンパク質分解に重要であることを見出した。このことは、従来非選択的と考えられていたラジカルによるタンパク質分解が、実は選択性を有してタンパク質分解を誘導している可能性を示唆する。そこで、本研究では、ラジカルによる分解に必要なラジカル感受性ペプチドシグナルを発見し、その生理的役割を解明することを目的とし、研究を行っている。本年度は、ラジカル、あるいはROSの産生により分解が誘導されるタンパク質を網羅的に同定した。具体的には、(1)YM-53601存在下、紫外線を細胞に照射する、(2)過酸化水素を細胞に処理する、(3)フェロトーシスの誘導剤であるRSL3を細胞に処理する、の3条件でサンプルを作製し、質量分析によりタンパク質の発現量の変化を測定した。その結果、各々の条件で、有意に発現量の低下が認められたタンパク質を同定することができた。さらに、いくつかのタンパク質は複数の条件で発現量の低下が認められた。従って、これらのタンパク質は、ラジカルに対する感受性の高いタンパク質である可能性が考えられる。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
ラジカル、あるいはROSの産生により、発現量が低下するタンパク質を網羅的解析により同定することができたから。
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Strategy for Future Research Activity |
今回、質量分析により同定した候補タンパク質について、ウェスタンブロティング法により発現量が低下しているか、確認する。確認ができたタンパク質について、欠損変異体を作製し、どの領域がラジカル、あるいはROSの産生による分解に重要であるか、同定する。また、同定した領域を任意のタンパク質に融合し、ラジカル、あるいはROSの産生により分解が誘導されるか、確認する。さらに、同定した領域と相同性の高い配列を有するタンパク質に着目し、ラジカル、あるいはROSの産生により同様に分解が誘導されるか検討する。一方、同定したタンパク質のラジカル、あるいはROSの産生による分解の生理的役割を明らかにする。
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Report
(1 results)
Research Products
(4 results)