F1クローン系統育種基盤形成への画期的アプローチ－倍加半数体の量産技術の改良－

Research Project

Project/Area Number	22K05838
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Allocation Type	Multi-year Fund
Section	一般
Review Section	Basic Section 40040:Aquatic life science-related
Research Institution	Kindai University
Principal Investigator	小林徹近畿大学, 農学部, 教授 (00298944)
Project Period (FY)	2022-04-01 – 2025-03-31
Project Status	Granted (Fiscal Year 2023)
Budget Amount *help	¥2,860,000 (Direct Cost: ¥2,200,000、Indirect Cost: ¥660,000) Fiscal Year 2024: ¥910,000 (Direct Cost: ¥700,000、Indirect Cost: ¥210,000) Fiscal Year 2023: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000) Fiscal Year 2022: ¥910,000 (Direct Cost: ¥700,000、Indirect Cost: ¥210,000)
Keywords	倍加半数体 / 染色体操作 / 雌性発生 / 卵割阻止 / 異種刺激処理のコンビネーション / 中心小体 / ホモ接合 / 同型遺伝子系統 / 複数回高温刺激処理
Outline of Research at the Start	本課題では、魚類養殖に新しい「クローン系統育種」を実現するため、「魚類の卵割阻止技術」を極限まで向上させる。すなわち、雌性発生胚の卵割阻止を確実かつ高頻度に実現するために、「複数回の高温刺激処理」に「異種刺激処理のコンビネーション効果」を加えて、さらに効果的な卵割阻止処理条件を検討するとともに、その細胞学的メカニズムを明らかにする。クローン育種素材としての倍加半数体（完全ホモ型二倍体）の作出をさらに簡易化し、多くの品種素材をもととするF1クローン育種事業の展開に繋げたい。
Outline of Annual Research Achievements	ダブルヒートショック処理雌性発生卵への低温処理が卵割阻止効果と生存性におよぼす影響Ⅱ 【目的】昨年度に引き続き、雌性発生D-HSTホンモロコ卵への低温処理を試み、生存性および倍数性への影響を調べた。昨年度は、0.3℃の低温刺激を施した区では、HSよりも著しく孵化率が低くなった。このことから、この低温処理強度が強すぎると考え、今年度は4℃の低温刺激を試みた。【方法】遺伝的不活性精子で授精した卵を、20℃の水槽に撒き、6枚のすりガラスに付着させた。1枚は雌性発生対照区(GC)、残りの5枚は受精後25分から2回の高温にさらした。このうち1枚は高温処理のみ(HS)、残り4枚には高温処理直後から20分間、40分間、60分間、80分間の4℃の低温処理を施した。これらの孵化率、孵化仔魚の形態および倍数性を調べた。【結果】孵化率は通常受精(IC)で62.9％、GCは57.1％、HSでは13.1％であった。低温処理を加えた実験区の孵化率は20分区5.4％、40分区3.1％、60分区1.0％、80分区1.5％であり、0.3℃と比較すると、孵化率は増加傾向を示し、3回の実験のいずれでも生存が確認できた。正常形態を示す孵化仔魚の割合はICで91.6％、GCは2.2％、HSでは3.6％であったのが、低温刺激20分区では8.2％、40分区13.9％、60分区41.7％、80分区25.0％と、4℃の場合もHSより低温処理区の正常仔魚の割合は増加した。さらに二倍体の割合は84.3±8.1％(平均±標準偏差, n=3)、GCは2.0±0.1％、HSでは6.7±3.8％であったのが、低温刺激20分区では38.2±19.8％、40分区50.8±42.7％、60分区69.4±33.7％、80分区47.5±38.9％と増加傾向を示した。このことから、さらなる低温処理強度の緩和を検討すべきと考えられた。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 昨年の結果に続いて、さらに４℃の低温処理で成績の向上傾向が見られたことから、さらに最終年度でよい条件を探したい。
Strategy for Future Research Activity	ひきつづき、ダブルヒートショックへの低温処理のコラボレーションを検討するとともに、卵割阻止処理を施した卵における中心小体の破壊された中心体、紡錘体の映像を得ることに全力を注ぎたい。卵の固定条件を再チェックし、免疫分染を再度試みる。