| Project/Area Number |
22K06986
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 49020:Human pathology-related
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| Research Institution | Toho University |
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Principal Investigator |
深澤 由里 東邦大学, 医学部, 講師 (90392331)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
藤澤 千恵 東邦大学, 医学部, 講師 (10393000)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2026-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2024)
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| Budget Amount *help |
¥4,030,000 (Direct Cost: ¥3,100,000、Indirect Cost: ¥930,000)
Fiscal Year 2024: ¥780,000 (Direct Cost: ¥600,000、Indirect Cost: ¥180,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
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| Keywords | 大腸癌 / 癌間質 |
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| Outline of Research at the Start |
近年、癌間質において多種細胞間制御を担う重要な分子としてmicroRNA (miRNA)が注目されているが、その働きの詳細は未だ明らかでない。我々が同定したmiRNA146bは、癌研究において様々な種類の癌細胞内での高発現が腫瘍増殖に関連するなどの報告はあるが、癌間質における関与は不明である。そこで本研究では、miRNA146bKOラットを用いて大腸癌の癌間質におけるmiRNA146bの制御標的分子を選出し、その分子を癌間質マーカーとしてヒト大腸癌組織の癌間質での発現分布を免疫組織化学染色で確認する。その結果を患者の予後情報を併せて統計学的に解析し、予後予測因子となる癌間質マーカーを同定する。
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、miRNA-146bノックアウト（KO）ラットおよび野生型（Wild）ラットを用いて、1,2-dimethylhydrazine（DMH）による大腸癌モデルを作製した。得られた腫瘍組織および周囲の非腫瘍大腸組織から、それぞれ初代線維芽細胞の樹立を試みた。酵素処理には、collagenase D＋Dispase、Liberase、collagenase単独など、複数の条件を検討した。腫瘍部位では腫瘍表面の付着物の除去が難しいこと、そして粘膜内病変が多く間質反応を示す浸潤部の組織が少量であることから、線維芽細胞の回収には至らなかった。一方、正常大腸組織からの線維芽細胞の樹立については、同様に複数の酵素処理条件を検討するとともに、EDTAを用いた上皮細胞の剥離法や、粘膜表面の物理的な剥離法なども併用した。その結果、最適な処理条件を見出し、正常大腸組織から線維芽細胞の樹立に成功した。今後は、得られた大腸由来線維芽細胞を用いて、miRNA-146b KOラットとWildラット間の線維芽細胞の性質の違いを詳細に解析する予定である。また、すでに作製済みのmiRNA-146b KOラットの腫瘍組織のパラフィン包埋切片を用い、I型コラーゲンおよびⅢ型コラーゲンの免疫組織化学染色を行った。その結果、I型コラーゲンは間質全体に広く陽性像を示したが、KOラットとWildラット間で有意な発現差は認められなかった。Ⅲ型コラーゲンは少数の陽性像をみとめたものの明瞭な染色像を得ることができなかった。今後、すでに知られている間質マーカーの免疫組織化学染色を施行し、間質の性状の違いを検討していく予定である。Sirius-Red染色による膠原線維の分布について条件を再検討し観察することも継続している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
ラットの大腸組織より初代培養線維芽細胞を得る条件を検討するのに予想以上に時間がかかったため。また免疫組織化学染色で使用する抗体で特異的に染色される抗体および条件を検討するのに時間がかかったため。
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| Strategy for Future Research Activity |
初代線維芽細胞を得ることができたため、研究分担者と協力し、分子生物学的検討を行っていく。
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