CRISPR screen to identify novel molecular mechanisms of HIV-1 latency
Project/Area Number |
22K07085
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Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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Allocation Type | Multi-year Fund |
Section | 一般 |
Review Section |
Basic Section 49060:Virology-related
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Research Institution | Kyoto University |
Principal Investigator |
白川 康太郎 京都大学, 医学研究科, 助教 (80728270)
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Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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Budget Amount *help |
¥4,290,000 (Direct Cost: ¥3,300,000、Indirect Cost: ¥990,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
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Keywords | HIV / 潜伏感染 / shock and kill / 潜伏感染再活性化薬 / HIV感染症根治療法 / HIV感染症 / CRISPRスクリーン |
Outline of Research at the Start |
申請者はHIV-1潜伏感染細胞モデルとCIRPSRスクリーンを用いて新規潜伏感染関連遺伝子群を同定した。本研究では1)新規同定された潜伏感染維持に関与する遺伝子群をノックアウトした際のHIV-1再活性化への影響を、ゲノムレベル、エピゲノムレベル、細胞代謝、ミトコンドリア機能、細胞周期など多角的に解析し、2)BLIPを有するHIV-1感染者末梢血よりCD4陽性T細胞のシングルセル解析を行う。以上により潜伏感染再活性化のメカニズムを明らかにすることで潜伏感染を標的とする新規治療開発の基盤とすることを目的とする。
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Outline of Annual Research Achievements |
二重蛍光レポーターHIVGKOを感染させたJurkat T細胞からmKO陽性の潜伏感染細胞モデル(JGL)を用いてCRISPRスクリーニングを行い、ノックアウトによりHIV転写の活性化を示す4遺伝子を同定した。JGL細胞およびGFPレポーターをもつJ-Lat細胞株6.3, 8.4, 11.1および5A8をもちいてこれらの遺伝子のノックアウトによりHIV転写が活性化することを確認した。この際、ウエスタンブロットでGagの発現を確認できた。さらにTet-on shRNAを用いてこれらの遺伝子のノックダウンが同様にHIV転写を活性化することを示した。また、これらの遺伝子に関連する化合物を培地に添加することでJGLおよびJ-LatのHIV転写の活性化が誘導され、新たなメカニズムの潜伏感染再活性化薬として作用することを発見し研究を継続している。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
関連する化合物のスクリーニングが進んでおりポジティブヒットを発見しているため。
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Strategy for Future Research Activity |
引き続き化合物によるJGL細胞のHIV転写再活性化の分子メカニズムを明らかにする。
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Report
(1 results)
Research Products
(1 results)