Project/Area Number |
22K07106
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Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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Allocation Type | Multi-year Fund |
Section | 一般 |
Review Section |
Basic Section 49060:Virology-related
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Research Institution | Showa Pharmaceutical University |
Principal Investigator |
梶川 瑞穂 昭和薬科大学, 薬学部, 講師 (00464389)
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Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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Project Status |
Granted (Fiscal Year 2022)
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Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000)
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Keywords | カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス / 免疫回避 / 溶解感染 / ウイルス / ユビキチンリガーゼ / ユビキチン |
Outline of Research at the Start |
免疫不全症の患者における重篤な肉腫形成に関与するカポジ肉腫関連ヘルペスウイルス(KSHV)は、感染細胞においてウイルス膜タンパク質K1を発現し、細胞のがん化を促進する。同時に、K1は細胞外領域を用いて、FasやBCRに結合して宿主免疫を阻害するため、免疫回避分子としても知られている。本研究はK1-Fc融合分子およびcDNAウイルスライブラリーの技術を利用して、FasおよびBCRとは異なる第三のリガンドを同定し、K1の免疫回避分子としての未知の働きを明らかにしようというものである。
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Outline of Annual Research Achievements |
カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス(Kaposi’s sarcoma associated herpesvirus:KSHV)は、感染しても発症せずにB細胞内にエピソームとして持続的に存在する潜伏感染性のウイルスである。しかし、AIDS発症者などの免疫不全患者においては溶解感染に移行して感染性粒子が生産され、予後不良の肉腫やリンパ腫の形成に関与する。KSHVが溶解感染時に発現するウイルス膜タンパク質のひとつであるK1は、感染細胞を増殖因子非依存的に常時活性化する。したがって、K1はKSHV感染細胞の腫瘍化にとって非常に重要な分子であると考えられている。また、K1の細胞外領域は、KSHV感染細胞に発現する宿主のBCRおよびFASと相互作用することで、それぞれが関与する免疫応答すなわちB細胞の活性化やアポトーシスを阻害するため、K1には免疫回避分子としての側面もある。我々は、K1の細胞外領域について、既知の宿主リガンドとは異なる第三の宿主リガンドが、T細胞由来の培養細胞であるJurkat細胞の表面に存在することを見出した。本研究では、Jurkat細胞表面に存在する新たな宿主リガンドを同定するために、Expression cloning法を実施した。2022年度は、Jurkat細胞に発現する全mRNAをもとにしたcDNAを合成してレンチウイルスベクターに組み込んだ、Jurkat cDNAレンチウイルスライブラリーを構築した。そしてこのライブラリーを、K1が結合しないことがわかっているBJAB細胞に感染させ、Jurkat cDNA導入BJAB細胞の集団を作製した。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
2022年度の実施計画は、Jurkatに発現するmRNAをもとにcDANを合成し、レンチウイルスベクターに組み込んだJurkat cDNAレンチウイルスライブラリーを構築すること、およびこれをK1が結合しないBJAB細胞に感染させてJurkat cDNA導入BJAB細胞を作製することであった。これらの実施計画を実際に達成できたことから、おおむね順調に進展していると判断した。
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Strategy for Future Research Activity |
今後はJurkat cDNA導入BJAB細胞の集団のうち、K1結合能を獲得した細胞をセルソーターによって単離し、取り込まれたcDNAの塩基配列を同定する。
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