| Project/Area Number |
22K07412
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 52010:General internal medicine-related
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| Research Institution | Gunma University |
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Principal Investigator |
後藤 七海 群馬大学, 大学院保健学研究科, 助教 (80782482)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
小田 司 群馬大学, 生体調節研究所, 助教 (10323643)
齋藤 貴之 群馬大学, 大学院保健学研究科, 教授 (80375542)
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| Project Period (FY) |
2022-04-01 – 2025-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2022: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
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| Keywords | 急性骨髄性白血病 / Tet-onシステム / APEX1 / 多発性骨髄腫 / NF-κB |
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| Outline of Research at the Start |
急性骨髄性白血病(AML)は依然として予後不良な疾患であり、新たな治療戦略が求められている。我々はこれまで、AMLとDNA修復の関係に着目し、塩基除去修復遺伝子が高発現すること、その中のAPE1のノックダウンや阻害剤により、AML細胞の増殖を抑制できることを明らかにした。多機能蛋白であるAPE1は、DNA修復の他、NF-κBなど多くの転写因子を制御し、さまざまな細胞内イベントに関与する(APE1ネットワーク)。本研究では、これまでの成果を発展させ、AMLの治療抵抗性におけるAPE1ネットワークとNF-κB経路の相互作用の役割を明らかにし、AMLの新たな治療戦略の糸口とする。
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| Outline of Annual Research Achievements |
過年度に樹立したAPEX1 knockout 株について、増殖に対する抑制が極めて強く、分化やアポトーシスの亢進といった表現型の再現性を確認することが困難であった。
そこで、増殖への影響を軽減するためにTet-Onシステムを用いた薬剤誘導型のAPEX1 knockout株の樹立を試み、1株の樹立に成功した。しかしながら、コントロールと比較しAPEX1の発現がほとんど低下しなかった。gRNAは90%以上に導入されているのに対し、Cas9の誘導率が50%未満と低いことが原因であった。今後は、代替モデルである多発性骨髄腫のAPEX１ knockout株や、APEX1阻害剤を用いた検討を行なうこととし、造血器腫瘍におけるAPEX1の機能的意義を検討していく予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
Tet-Onシステムを用いた薬剤誘導型のAPEX1 knockout株の樹立を試み、1株の樹立に成功したが、コントロールと比較し、APEX1の発現がほとんど低下しなかった。gRNAは90%以上に導入されているのに対し、Cas9の誘導率が50%未満と低いことが原因であった。代替モデルとして樹立した多発性骨髄腫株の表現型解析については、定常状態での表現型は特になく、今後、低酸素条件下での表現型を調べる予定である。
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| Strategy for Future Research Activity |
急性骨髄性白血病株を用いた検討では、今後はKnockoutではなくAPEX1阻害剤を用いた検討に移行する予定である。すでに複数のAPEX1阻害剤を入手しており、DNA修復や転写因子制御と多岐にわたるAPEX1の機能を特異的に阻害することで、各機能の意義を調べることが出来ると期待している。また代替モデルである多発性骨髄腫でのAPEX1 knockout株においては、低酸素条件による細胞増殖等への影響のほかRNAシーケンスによる網羅的な遺伝子発現変動を解析し、影響を受ける遺伝子・経路を明らかにしたい。
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